【摘 要】
：
目的 原核表达和纯化Tamdy病毒(TAMV)核蛋白(NP),以此为抗原建立间接ELISA方法,以期用于TAMV感染血清流行病学调查.方法 采用PCR法扩增NP基因,构建重组质粒(pET-32a-NP)并转化至E.coli BL21中诱导表达NP蛋白,15％SDS-PAGE鉴定和镍柱亲和层析纯化重组NP蛋白,以TAMV阳性羊血清为一抗,采用ELISA检测其抗原性.以纯化的pET-32a-rNP作为包被抗原,通过方阵滴定优化反应条件,建立检测TAMV血清抗体的间接ELSIA方法,评价其重复性、敏感性和特异性
【机 构】
：
新疆大学生命科学与技术学院,新疆乌鲁木齐830046;新疆生物资源基因工程重点实验室
论文部分内容阅读
目的 原核表达和纯化Tamdy病毒(TAMV)核蛋白(NP),以此为抗原建立间接ELISA方法,以期用于TAMV感染血清流行病学调查.方法 采用PCR法扩增NP基因,构建重组质粒(pET-32a-NP)并转化至E.coli BL21中诱导表达NP蛋白,15％SDS-PAGE鉴定和镍柱亲和层析纯化重组NP蛋白,以TAMV阳性羊血清为一抗,采用ELISA检测其抗原性.以纯化的pET-32a-rNP作为包被抗原,通过方阵滴定优化反应条件,建立检测TAMV血清抗体的间接ELSIA方法,评价其重复性、敏感性和特异性.检测采自新疆部分地区动物血清,采用建立的ELISA方法检测TAMV抗体.结果 成功构建pET-32a-NP重组质粒和表达菌株pET-32a-rNP,重组蛋白大小约为72 ku并具有反应原性;ELISA优化试验确定的最佳包被浓度为4 μg/ml、封闭液浓度为3％、血清稀释度为1∶100、血清孵育时间为100 min,酶标抗体稀释度为1∶3 000,TMB显色时间为6 min;通过检测30份阴性样品确定临界值,当样品吸光充A450值≥0.268时判定为阳性;重复性试验结果表明,批内和批间变异系数(CV)＜10％.敏感性试验表明,阳性血清稀释度达1∶600,具有良好的敏感性.特异性试验表明,该方法不与GTV、CCHFV和SFTSV发生交叉反应.取464份采自新疆不同地区的羊、狗和鼠血清标本进行ELISA检测,检出TAMV阳性血清68份,阳性率14.66％.结论 建立的检测TAMV血清抗体的间接ELISA方法敏感、特异,且重复性良好,可用于TAMV的血清流行病学调查.
其他文献
目的 观察准分子激光前弹力层下角膜磨镶术(Bowman keratomileusis,SBK)和准分子激光上皮下角膜磨镶术(laser epithelial keratomileusis,LASEK)矫正高度近视的临床效果和对眼表的影响.方法 前瞻性试验研究,选取2018年3月至2019年6月,高度近视患者110例212只眼,按照手术方式不同分为SBK组患者67例130只眼和LASEK组患者43例82只眼.术后1、3和6个月,比较两组患者视力和屈光度,进一步分析两组泪膜稳定性包括泪膜破裂时间(tear b
目的 观察Nd∶YAP激光结合牙髓血运重建术治疗根尖周炎的疗效及其对龈沟液中相关生长因子表达量的影响.方法 选择2016年1月至2017年12月,恒牙合并根尖周炎患者120例,按消毒方法不同分为对照组和激光组,每组患者60例,对照组以三联抗生素糊剂方式封药消毒;激光组以Nd∶YAP激光照射消毒.两组患者采用不同消毒方法后,均行牙髓血运重建术,术后2年随访,比较两组治疗前后临床疗效、不良反应发生率、牙根管壁厚度及牙冠根比,并计算治疗后两组患牙的骨质样组织沉积率.术后6个月,比较两组血管内皮生长因子(vasc
目的 研究二氢卟吩e6(chlorin e6,Ce6)及Ce6脂质体(Liposomes)对肺癌的光动力作用效果.方法 采用薄膜蒸发法制备Lip@Ce6,检测其表征、形态、包封率.将45只实验裸鼠随机分为9组,每组5只,分别为空白对照组、模型对照组(A组)、激光组(B组)、Ce6-PDT组根据光敏剂浓度2.5 mg/kg、5 mg/kg、10 mg/kg设置三组(C1组、C2组、C3组)、Lip@Ce6-PDT组根据光敏剂浓度2.5 mg/kg、5 mg/kg、10 mg/kg设置三组(D1组、D2组、D
目的 探讨弱激光对正畸治疗过程中牙齿疼痛和牙周炎症的影响,为其临床应用奠定数据支撑.方法 前瞻性研究2017～2018年,AO自锁托槽正畸治疗患者65例,分为研究组和对照组,两组患者均在拔除上颌第一前磨牙后置入AO自锁托槽.其中对照组患者32例,正畸治疗过程中采用常规口腔管理;研究组患者33例,正畸后1、3和7d予以波长810 nm激光照射,能量密度15.9 J/cm2,每个点照射时间20 s.之后每月照射1次,直至取出微种植体.两组患者分别于AO自锁托槽和植入微种植体后1、3和7d比较正畸治疗过程中的疼
痤疮是一种慢性炎症性皮肤病,具有易复发、病程长的特点,多发于青年人[1,2].痤疮主要表现为结节、脓包、粉刺和丘疹等多种皮肤损伤,患者痊愈后会出现为增生性、凹陷性瘢痕,其中以凹陷性瘢痕最为常见,严重影响患者的心理、日常生活及日常工作[3].CO2点阵激光可促使瘢痕弹性纤维组织以及纤维胶原再生,在增生性瘢痕的治疗中疗效较好[4];透明质酸敷料具有保湿作用强、理化性质稳定的优点[5].目前,关于透明质酸敷料联合CO2点阵激光在痤疮凹陷性瘢痕患者中的影响研究较少.为此,2017年1月至2019年12月,笔者采用
昼夜节律系统由生物钟驱动,通过调节新陈代谢相关的关键酶、激素等,调控机体内部代谢过程,从而使生物体预测并适应外界昼夜变化的环境.光是调节昼夜节律与外界环境同步的最重要的信号,异常光照引起的昼夜节律紊乱可增加代谢性疾病的患病风险.本文阐述了光调节生物钟的分子机制和同步昼夜生物节律的特点,总结了异常光照与糖脂代谢紊乱相关疾病联系的最新研究进展.
二氧化碳激光器(carbon dioxide laser)的临床应用已有近四十年的历史.现有的医用CO2激光设备的种类和规格繁多,适于CO2激光器治疗的病种多,使用的科室也较多,是激光医学领域的一种重要的治疗技术和设备.本文对CO2激光器的基本原理、结构、性质和医学应用做一系统综述.
白癜风是一种常见的、难治性色素性皮肤病,临床表现为局部色素脱失,在我国的患病率为0.1％～2.7％.病因目前尚不明确,严重影响患者容貌和心理[1].目前,白癜风的治疗方法多种多样,包括维生素D衍生物、免疫调节剂、皮质类固醇激素、光疗及手术自体移植等,但单一方法均无满意疗效,临床上多采用联合治疗[2],目的主要是控制色素脱失斑的进展.光物理治疗(主要有紫外线、红外线和剥脱性点阵激光等)联合药物治疗白癜风是近年来皮肤性疾病临床治疗的热点探索方法[3].2017年8月至2019年9月,笔者观察了高能紫外线、复方
目的 检测PRRSV病毒体外感染原代猪肺泡巨噬细胞(PAM)对猪源IFITM分子mRNA转录水平的影响.方法 无菌采集PRRSV、PCV2和JEV阴性仔猪肺脏,分离PAM并用PRRSV病毒接种感染.于感染后不同时间点收集细胞,采用PCR检测PAM细胞PRRSV感染情况,采用荧光定量PCR检测PRRSV在PAM细胞中的复制情况以及IFITM分子mRNA的转录水平变化.结果 成功分离到猪原代PAM细胞,接种PRRSV后出现明显的细胞病变.荧光定量PCR检测结果显示,PRRSV感染12h后可显著上调PAM细胞中
目的 分离进口胎牛血清中的牛病毒性腹泻-粘膜病病毒(BVDV)毒株并进行系统进化分析.方法 通过RT-PCR检测购买胎牛血清中的BVDV核酸,确定有BVDV污染后.将该血清样品接种MDBK细胞,连续传代5次,利用免疫荧光、PCR扩增、测序以及遗传进化分析等方法对其进行鉴定.结果 成功分离到1株BVDV毒株,PCR和免疫荧光检测均为BVDV阳性,命名为FBS-TL20.基于5\'UTR、Npro和E2基因序列的同源性分析表明,FBS-TL20毒株与分离自埃及新生羊体内的毒株BSU1同源性分别为99.18