研究特应性皮炎(AD)儿童急性病变处表皮丝聚合蛋白(FLG)表达的情况，并探讨神经酰胺对FLG表达的影响。
方法通过皮肤环钻术获取2012年6月至2013年6月解放军空军总医院儿科门诊收集的15例AD患儿(AD组)急性期病损皮肤标本，并选取我院整形科患儿进行皮肤移植手术剩余的正常皮肤作为对照组皮肤标本，通过免疫组织化学方法研究FLG表达情况。培养原代角质形成细胞和HaCaT细胞，分为实验组和平行对照组，应用细胞计数试剂盒(CCK-8)检测不同浓度的神经酰胺(0.25、0.5、1.25、2.5、5、10 μmol/L)对2种细胞的毒性作用，筛选对细胞无毒的较大浓度作为实验浓度。给予实验浓度神经酰胺干预24、48 h后(平行对照组不加入神经酰胺)，通过实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应及蛋白质印迹法(Western blot)在mRNA水平及蛋白水平检测FLG的表达变化。
结果免疫组织化学染色结果提示，与对照组相比，AD组皮肤FLG的表达明显减弱。CCK-8试剂盒检测结果显示神经酰胺对细胞的损伤有明显的浓度依赖性，最终选取2 μmol/L为实验浓度。给予神经酰胺2 μmol/L干预24、48 h后，HaCaT细胞和原代角质形成细胞FLG mRNA水平均高于平行对照组[干预24 h后：(2.31±0.11)比(1.00±0.47)、(1.92±0.76)比(1.00±0.42)，干预48 h后：(4.20±0.32)比(1.00±0.52)、(3.73±0.55)比(1.00±0.49)]，且干预48 h后mRNA水平高于干预24 h后，差异均有统计学意义(均P<0.05)。给予神经酰胺2 μmol/L干预48 h后，Western blot检测结果显示，原代角质形成细胞FLG蛋白表达水平明显高于平行对照组。
结论AD患儿表皮FLG表达减少，其异常表达导致皮肤屏障功能障碍可能是AD发病的病因之一。神经酰胺可能通过改善AD患儿FLG的表达，从而改善AD的皮肤屏障功能。