【摘 要】
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目的 肝癌衍生生长因子(HDGF)是近年来逐渐引起重视的一种细胞生长因子,在许多肿瘤细胞中高表达.本研究拟构建PNAi干扰慢病毒载体,沉默HDGF基因在大肠癌SW480细胞中的表达,观
【机 构】
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湖南师范大学第一附属医院(湖南省人民医院)消化科,湖南,长沙,410005;南华大学附属第二医院,湖南,衡阳,421001
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目的 肝癌衍生生长因子(HDGF)是近年来逐渐引起重视的一种细胞生长因子,在许多肿瘤细胞中高表达.本研究拟构建PNAi干扰慢病毒载体,沉默HDGF基因在大肠癌SW480细胞中的表达,观察细胞的增殖状态.方法 RT-PCR方法 检测HDGF基因在大肠癌中的表达.利用Invitrogen公司在线网站设计HDGF干扰序列,片段合成后构建慢病毒RNAi表达载体,随后利用293FT细胞将其包装成成熟慢病毒颗粒去感染SW480细胞,经Biasticidin抗性选择培养后,建立了稳定表达HDGF siRNA的SW480细胞株.实时荧光定量PCR和Western Blot检测HDGF基因在mRNA和蛋白水平表达变化;生长曲线和MTT法观察细胞增值情况的改变.结果 HDGF基因在大肠癌SW480细胞中表达较高.成功的构建了HDGF慢病毒KNAi表达载体,并建立了稳定表达靶向干扰HDGF基因表达的siRNA SW480细胞株.沉默HDGF基因在表达后,能明显体外抑制细胞的增殖.结论 针对HDGF基因的慢病毒RNAi载体能明显下调HDGF基因的表达,并在体外显著抑制大肠癌细胞增殖能力.
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