【摘 要】
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目的 了解缺氧对钙/钙调蛋白依赖性丝氨酸蛋白激酶(CASK)表达的影响及c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号通路在其中的作用.方法 将人血管内皮细胞株EA.hy926进行缺氧处理3 h后继续
【机 构】
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第三军医大学西南医院病理学研究所,第三军医大学全军烧伤研究所
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目的 了解缺氧对钙/钙调蛋白依赖性丝氨酸蛋白激酶(CASK)表达的影响及c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号通路在其中的作用.方法 将人血管内皮细胞株EA.hy926进行缺氧处理3 h后继续常规培养0、12、24、48、72 h,同时设常氧培养对照.采用蛋白质印迹法检测CASK的表达.构建CASK启动子区荧光素酶报告基因质粒.用其转染细胞后,于常氧及缺氧培养1、3、6、12 h裂解细胞提取总蛋白,检测报告基因萤火虫荧光素酶及内参照海肾素荧光素酶活性,并用蛋白质印迹法检测JNK磷酸化情况.在培养的细胞中分别加入不同剂量(0、10、100 nmol/L,1、10 μmol/L)的JNK抑制剂SP600125预处理1 h后再缺氧培养3 h,观察其对CASK表达的影响.结果 缺氧处理后常规培养0～72 h,细胞CASK持续保持高表达,并明显高于常氧组.随着缺氧时间延长荧光素酶相对活性普遍增加,均高于常氧组(0.010±0.003,P＜0.01),且缺氧12 h达峰值(0.192±0.023).JNK的磷酸化随缺氧时间延长逐渐增强.加入SP600125后,CASK的表达显著降低,并呈剂量-效应依赖性,其浓度为10 μmol/L时,抑制效率达高峰.结论 缺氧上调血管内皮细胞CASK的表达部分依赖于JNK信号通路活化.
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