【摘 要】
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目的:优化FuGENE(R)6 Transfection Reagent (FuGENE)转染质粒pEGFP-N1-HSF1到人绒毛膜癌细胞JEG-3的条件.方法:利用DNA延滞实验考察pEGFP-N1-HSF1质粒与FuGENE试剂的结合力,
【机 构】
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贵州医科大学,贵州省药物制剂重点实验室,贵阳550004上海药品审评核查中心,上海201203;上海交通大学医学院附属国际和平妇幼保健院,上海200030;
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目的:优化FuGENE(R)6 Transfection Reagent (FuGENE)转染质粒pEGFP-N1-HSF1到人绒毛膜癌细胞JEG-3的条件.方法:利用DNA延滞实验考察pEGFP-N1-HSF1质粒与FuGENE试剂的结合力,用不同剂量的FuGENE试剂和质粒转染JEG-3细胞,通过倒置荧光显微镜和血球计数法计算其转染效率,筛选出最佳的转染条件并进行转染,通过qRT-PCR检测HSF1 mRNA的水平.结果:DNA延滞实验显示FuGENE和pEGFP-N1-HSF1质粒具有较高的结合力,当质粒量一定时,随着FuGENE量的增加,其转染效率先增加后降低;当FuGENE和质粒比例为2∶1(μL∶μg)时,转染效率最高,达(39.05±1.19)％;当固定转染比例时,随着转染剂量的增加,其转染效率先增加后降低,当转染剂量为250 μL时,转染效率最高,达(42.98±2.56)％;qRT-PCR结果显示,转染组HSF1 mRNA的水平较对照组有显著上调.结论:在转染比例为2∶1,转染剂量为250 μL时,对JEG-3细胞有最佳的转染效率.
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