【摘 要】
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目的 基于小鼠肺癌细胞/小鼠成肌细胞(Lewis/C2C12)体外共培养模型研究六君子汤防治肿瘤恶病质的分子机制.方法 采用Lewis/C2C12细胞共培养方法模拟肿瘤恶病质的环境,并将细胞分为模型组、六君子汤组、信号传导及转录激活蛋白3(Signal transducer and activator of transcription3,STAT3)抑制剂Stattic组、联合用药组,并以正常培养的成肌细胞(C2C12)作为空白对照.各组药物分别作用细胞48h后,采用MTT法检测各组药物对肿瘤环境下C2C
【机 构】
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河南中医药大学基础医学院 郑州 450046
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目的 基于小鼠肺癌细胞/小鼠成肌细胞(Lewis/C2C12)体外共培养模型研究六君子汤防治肿瘤恶病质的分子机制.方法 采用Lewis/C2C12细胞共培养方法模拟肿瘤恶病质的环境,并将细胞分为模型组、六君子汤组、信号传导及转录激活蛋白3(Signal transducer and activator of transcription3,STAT3)抑制剂Stattic组、联合用药组,并以正常培养的成肌细胞(C2C12)作为空白对照.各组药物分别作用细胞48h后,采用MTT法检测各组药物对肿瘤环境下C2C12细胞生长的影响;免疫荧光法检测肿瘤环境下C2C12细胞中肌球蛋白重链(MyHC)的表达情况;酶联免疫吸附测定(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA),检测共培养条件下C2C12培养基上清中白介素-6(interleukin-6,IL-6)的含量;蛋白质印迹法(Western Blot,WB)检测肿瘤环境下C2C12细胞中IL-6/STAT3信号通路相关蛋白表达情况的影响.结果 MTT结果显示六君子汤和Stattic最佳浓度分别为1000μg/m和3μM;倒置显微镜下观察到当Lewis/C2C12共培养比例为1:1时,肌管出现萎缩、变细,MyHC蛋白表达最强;Elisa检测结果显示,与模型组比较三个药物组中IL6含量均降低;Western blot检测显示,与空白对照组比较,模型组STAT3、JAK2、MAFbx、MuRF1蛋白表达显著升高,三组药物干预后出现表达降低的改变.结论 六君子汤可缓解肿瘤环境下肌肉蛋白的降解,其机制与抑制泛素蛋白酶体系统(Ubiquitin-proteasome system,UPS)活性有关,六君子汤可通过抑制IL-6/STAT3信号的活性从而关闭UPS途径,另外还可能通过调控其他信号而关闭UPS途径,从而缓解肿瘤恶病质肌肉降解.
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