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目的：对采用大孔树脂法纯化黑豆酯酶的工艺进行优化，确定其最佳工艺条件。方法首先通过静态吸附和洗脱试验，以黑豆酯酶的吸附率和洗脱率为指标，筛选最佳树脂。然后进行动态吸附和洗脱试验，研究上样稀释倍数、洗脱剂体积分数和洗脱剂体积3因素对洗脱率的影响。最后以黑豆酯酶得率和比活力为指标，用L16(43)正交实验进行优化。结果通过筛选发现， D301R树脂吸附率和洗脱率都较高。动态吸附和洗脱实验中获得最佳工艺条件为：上样稀释倍数为40倍，洗脱剂体积分数为60%，洗脱剂用量为20 mL。在此条件下黑豆酯酶得率为(89.39±1.65)%，黑豆酯酶比活力(6.585±0.090) U/mg。结论与粗酶的纯度相比，优化后的大孔树脂法纯化黑豆酶工艺的提纯倍数达到6.143倍，为黑豆酯酶的提纯和有机磷农药残留的检测提供了科学依据。