重组人MG53蛋白对人脐带间充质干细胞氧化损伤的保护作用

• 作 者: 黄团结 宋及时 马珊珊 程康 邢衢 李鹏 刘腾飞 杨波 关方霞
• 机 构: 450001 郑州大学生命科学学院,450001 郑州大学生命科学学院,450001 郑州大学生命科学学院,450001 郑州大学生命科学学院,450001 郑州大学生命科学学院,450001 郑州大
• 出 处: 中华细胞与干细胞杂志电子版
• 发表日期: 2017年7期
• 关键词: 间充质干细胞 氧化损伤 MG53 细胞衰老 细胞增殖 沃顿胶 流式细胞仪检测 单因素方差分析 分离培养 衰老细胞

目的

建立人脐带间充质干细胞（hUC-MSCs）的H₂O₂氧化损伤模型，探讨重组人MG53蛋白（rhMG53）对hUC-MSCs氧化损伤的保护作用。

方法

使用组织块培养法从健康人脐带沃顿胶组织中分离培养hUC-MSCs，流式细胞仪检测细胞表型；CCK-8法检测hUC-MSCs的增殖和H₂O₂损伤程度。实验分为正常对照组（NC组）、rhMG53组、H₂O₂组和H₂O₂+rhMG53组。分别采用CCK-8法、Transwell小室、流式细胞术和β-半乳糖苷酶染色检测rhMG53蛋白对hUC-MSCs增殖、迁移、周期凋亡和衰老的影响。各组、各个时间点的吸光值采用析因设计的方差分析，组间比较采用单因素方差分析。

结果

hUC-MSCs贴壁呈梭型生长，高表达间充质干细胞标志CD44、CD133、HLA-ABC，低表达CD34、CD45；H₂O₂对hUC-MSCs具有浓度和时间依赖性的损伤作用，确定200μmol/L的H₂O₂处理16 h为hUC-MSCs氧化损伤的最适条件。与NC组相比，H₂O₂组细胞增殖（0.994±0.011vs1.331±0.014）、迁移率（8.15﹪±2.47﹪ vs33.34﹪±3.62﹪）和S期细胞比例（29.67﹪±3.69﹪ vs34.33﹪±4.25﹪）显著降低，细胞衰老（44.07﹪±5.26﹪ vs5.7﹪±1.42﹪）和凋亡比例（52.63﹪±5.76﹪ vs4.65﹪±1.23﹪）显著增加，差异具有统计学意义（均P < 0.05）；rhMG53组细胞增殖（1.509±0.086vs1.331±0.014）和迁移率（52.13﹪±5.46﹪ vs33.34﹪±3.62﹪）显著提高，S期比例（35.27﹪±4.79﹪ vs34.33﹪±4.25﹪）变化差异无统计学意义（P> 0.05），细胞衰老（3.92﹪±1.31﹪ vs5.7﹪±1.42﹪）和凋亡比例（3.96﹪±1.06﹪ vs4.65﹪±1.23﹪）显著降低，差异具有统计学意义（均P< 0.05）。与H₂O₂组相比，H₂O₂+ rhMG53组细胞增殖（1.252±0.056vs0.994±0.011）、迁移率（18.93﹪±3.12﹪ vs 8.15﹪±2.47﹪）和S期比例（34.84﹪±3.45﹪ vs29.67﹪±3.69﹪）显著提高，细胞衰老（17.89﹪±2.64﹪ vs44.07﹪±5.26﹪）和凋亡比例（4.65﹪±1.23﹪ vs17.63﹪±2.56﹪）显著降低，差异具有统计学意义（均P< 0.05）。

结论

rhMG53对H₂O₂造成的hUC-MSCs氧化损伤有保护作用。