【摘 要】
：
目的:新型琼胶酶基因的筛选。方法:根据α-琼胶酶基因序列的同源性,设计了兼并引物,利用兼并PCR对所筛选到的琼胶酶产生菌株进行筛选,阳性菌株进行16s rDNA序列测定并构建了
【机 构】
：
中国海洋大学医药学院海洋药物教育部重点实验室山东省糖科学与糖工程重点实验室;
【基金项目】
：
国家自然科学基金项目(31070712;31000361);国家高技术研究发展计划(863计划)(2011AA090703);海洋公益性行业科研专项(201105027-3)
论文部分内容阅读
目的:新型琼胶酶基因的筛选。方法:根据α-琼胶酶基因序列的同源性,设计了兼并引物,利用兼并PCR对所筛选到的琼胶酶产生菌株进行筛选,阳性菌株进行16s rDNA序列测定并构建了进化树。利用染色体步移技术Site-finding PCR获得目的基因的上下游序列,经过拼接获得全长的目的基因序列,并利用Blast对其进行分析。将目的基因插入pET 24a(+)载体,转化大肠杆菌BL21(DE3),利用平板水解圈初步鉴定了重组酶的性质,并利用DNS法检测了重组酶发酵上清液的酶活。结果:获得了一株疑似α-琼胶酶产生菌株,16s rDNA序列鉴定显示为Thalassomonas sp.,命名为Thalassomonas sp.LD5。获得了一个新的基因,命名为agaD。agaD开放阅读框长4401 bp,编码1466个氨基酸,理论分子量为158.8kDa。序列分析表明,agaD编码的蛋白AgaD与已有的两种α-琼胶酶的相似性分别为89%和77%。重组AgaD经诱导后可以直接降解琼胶平板产生水解圈,其发酵上清液酶活为0.2 U.ml-1,说明该蛋白为琼胶酶。结论:采用分子克隆技术分离出新的琼胶酶基因,该基因的发现为活性寡糖的制备提供了新的工具。
其他文献
说起家园和文化认同方面的问题时,我们常常会将它看成是移民作家面临的困惑,但实际上这已成为西方当代文学创作中面临的普遍问题,约翰·克里根(John Kerrigan)在近期的《批
生物体内存在多种游离物质,如小分子、自由基、离子、多肽、酶等,他们具有非常重要的生理作用;因此,对以上物质的有效检测对疾病的诊断、治疗和机理的研究显得尤为重要。过去
<正>高分子材料在给人类带来便利的同时,也给环境带来了严重的"白色污染"问题,开发可降解高分子材料代替通用的不可降解高分子材料,缓减环保压力,同时满足军用、环保领域及众
从2014年以来,政府与社会资本合作(Public-Private Partnership,PPP)模式成为我国基础设施和公共服务领域项目的力推模式。PPP模式在取得一定成效的同时,也出现了一些问题。
目的:研究尾加压素Ⅱ(Urotensin-Ⅱ,U-Ⅱ)、内皮素(Endocilin,ET)、肾上腺素质素(Adrenomedullin,ADM)在高血压患者血浆中含量的变化并探讨其临床意义。方法:采用放射免疫法
面对当前电子商务对国际经济贸易的影响较大的这种局面,应当采取有效的战略方针,推动电子商务不断优化和进步,促进国际经济贸易发展。对此,本文就电商对国际经济贸易的影响进
建立了综合化学开放性实验体系,同时对用于开放实验课程的评价体系进行研究。整个评价体系由授课教师、实验员教师、学生组长以及学生自己在整个实验过程中（实验前,实验中,实
消费是促进我国经济增长的重要因素,也是国内生产总值的重要组成部分。随着我国经济的增长,中国消费者的消费水平也在不断的增长着。然而相比较而言,中国消费者的消费总值占
<正>汗证是汗液外泄异常的一种病证,多为人体阴阳失调,营卫失和,腠理开阖不利而致,临床上有自汗、盗汗、脱汗、战汗之分,亦有局部的额汗、手足汗、半身汗之别,但以自汗、盗汗