【摘 要】
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目的 探究心力衰竭患者血浆中miR-106a-5p的表达水平及其影响人心肌细胞增殖和凋亡的潜在机制.方法 利用RT-qPCR检测45例心力衰竭患者和健康志愿者血浆中miR-106a-5p的表达水
【机 构】
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武汉市红十字会医院重症医学科 武汉市, 430015;武汉市第六医院药剂科 武汉市, 430019
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目的 探究心力衰竭患者血浆中miR-106a-5p的表达水平及其影响人心肌细胞增殖和凋亡的潜在机制.方法 利用RT-qPCR检测45例心力衰竭患者和健康志愿者血浆中miR-106a-5p的表达水平;利用Lipofectamine 2000转染miR-106a-5p模拟物及模拟物对照至人心肌细胞系,RT-qPCR验证转染效率后,分别使用CCK-8和流式细胞术检测各组转染细胞的增殖和凋亡水平;生物信息学结合双荧光素酶报告基因实验验证miR-106a-5p与接头蛋白GAB1的靶向关系;RT-qPCR和Western印迹检测转染miR-106a-5p对GAB1 mRNA和蛋白表达水平的影响;最后,将miR-106a-5p模拟物和GAB1的质粒共转染至人心肌细胞中,利用CCK-8和流式细胞术验证GAB1对miR-106a-5p诱导的心肌细胞增殖、 凋亡的回复作用.结果 心力衰竭患者血浆中的miR-106a-5p表达水平显著高于健康志愿者(t=48.54,P<0.001);CCK-8结果显示转染miR-106a-5p模拟物组人心肌细胞的A450值显著低于模拟物对照组和空白对照组(P<0.05);流式细胞仪结果显示过表达miR-106a-5p的人心肌细胞的凋亡率显著高于模拟物对照组和空白对照组(P<0.05);生物信息学分析结合双荧光素酶报告基因实验证实miR-106a-5p可结合到GAB1的3′-非翻译区(3′-UTR);RT-qPCR和Western印迹检测发现,过表达miR-106a-5p可显著抑制GAB1 mRNA和蛋白的表达水平;回复实验结果表明,过表达GAB1可逆转miR-106a-5p所致的心肌细胞增殖和凋亡能力改变.结论 miR-106a-5p在心力衰竭患者中显著上调,其可通过靶向调控GAB1蛋白的表达抑制人心肌细胞增殖和诱导人心肌细胞凋亡,从而参与心力衰竭的病理过程.
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