【摘 要】
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以分子生物学方法--聚合酶链式反应(PCR)技术为基础,初步探讨了食品中SARS病毒靶基因片段的多重PCR检测技术.根据GenBank公开发表的SARS病毒基因组cDNA序列,人工合成克隆特异
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以分子生物学方法--聚合酶链式反应(PCR)技术为基础,初步探讨了食品中SARS病毒靶基因片段的多重PCR检测技术.根据GenBank公开发表的SARS病毒基因组cDNA序列,人工合成克隆特异性靶基因DNA片段,以此片段作为阳性对照,并将其添加到罐装蘑菇、牛肉干、大豆、鱼干等食品的cDNA中作为阳性样品,再根据世界卫生组织推荐的引物序列合成引物,进行单PCR与多重PCR检测分析.结果表明:以单PCR法获得了121 bp、182 bp及302 bp 3条靶基因片段;以二重PCR法获得了121 bp+182 bp、121 bp+302 bp与182 bp+302 bp的靶基因片段组合;以三重PCR法获得了121 bp+182 bp+302 bp的靶基因片段组合.检测灵敏度的实验表明:182 bp片段的模板DNA量在0.003 ng以上时,单PCR都能扩出清晰的条带,而121 bp的靶基因片段只有模板DNA量在0.03 ng以上时,单PCR才能扩出清晰的条带.它们的二重PCR分析的灵敏度与相应的单PCR分析灵敏度相同.
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