基于vhhP2基因的SYBR Green I实时定量PCR检测哈维氏弧菌方法的建立

• 作 者: 廖梅杰 张正 荣小军 王印庚 刘智超 栾晶 李彬 王岚 陈贵
• 机 构: 中国水产科学研究院黄海水产研究所、农业部海洋渔业可持续发展重点实验室,山东省出入境检验检疫局
• 出 处: 中国水产科学
• 发表日期: 2014年3期
• 关键词: vhhP2基因 哈维氏弧菌 实时定量PCR SYBR Green I Vibro harveyivhhP2 genereal-time PCRSYBR Gree
• 基金项目: 国家863计划项目（2012AA10A412-4）,国家科技支撑计划项目（2012BAD17B03）,国家自然科学基金项目（31202-016）,科研院所技术开发研究专项项目（2011EG34219）,青岛市战略性新兴产业培育计划项目（13-4-1-65-hy）,山东省优秀中青年科学家奖励基金项目（BS2010SW035）.

根据哈维氏弧菌（Vibro harveyi）溶血素基因vhhP2的保守序列设计特异性引物,建立了SYBR Green I实时定量PCR检测哈维氏弧菌的方法。构建含vhhP2基因的重组质粒作为标准品,进行SYBR Green I实时定量PCR,在Tm 为60℃时,扩增产物的熔解曲线仅有一个特异峰,扩增所得标准曲线为 y=-3.331x＋37.48,相关系数为0.998,扩增效率为1,最低可检测到7个拷贝。实验结果表明该检测技术具有较高的特异性、敏感性和重复性,对哈维氏弧菌病的快速诊断和流行病学调查有重要意义