【摘 要】
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以往对cDNA克隆鉴定过程中,经斑点杂交筛选出的克隆数较多,在进一步的鉴定中不可避免地要进行质粒扩增、抽提、纯化酶解、片段分离等许多步骤。本文对这一步的鉴定采用了PCR
【机 构】
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上海市肿瘤研究所,上海市肿瘤研究所上海200032,上海200032,上海200032
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以往对cDNA克隆鉴定过程中,经斑点杂交筛选出的克隆数较多,在进一步的鉴定中不可避免地要进行质粒扩增、抽提、纯化酶解、片段分离等许多步骤。本文对这一步的鉴定采用了PCR技术,这样便可省去酶解及片段分离等繁琐步骤。且由于扩增片段纯净,故可直接用于Southern blot鉴定及DNA序列分析。 本文另一新的探索是利用PCR法标记探针,尤其是小片段DNA探针,其不同于常用的缺口平移和随机引物延伸标记。由于它在扩增过程中只有位于两个引物间的片段才能标上同位素,所以标记后的探针量大、比放射性强,加之PCR合成仪的
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