【摘 要】
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酸性蛋白酶在食品、酿造、饲料和皮革等行业具有重要的应用价值。然而,现有的酸性蛋白酶在50℃以上或pH大于3.0时不稳定,限制了其应用范围。为此,该研究通过分子克隆技术将黑
【机 构】
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工业发酵微生物教育部重点实验室（天津科技大学）,天津科技大学化工与材料学院
【基金项目】
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天津市高等学校创新团队培养计划<酶与生物催化关键技术>(TD12-5002);天津市国际交流与合作项目(14RCGHSY00181)
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酸性蛋白酶在食品、酿造、饲料和皮革等行业具有重要的应用价值。然而,现有的酸性蛋白酶在50℃以上或pH大于3.0时不稳定,限制了其应用范围。为此,该研究通过分子克隆技术将黑曲霉CICIM F0510的酸性蛋白酶基因expA在毕赤酵母中进行了克隆表达,构建获得了重组菌GS115（pPIC-expA）。摇瓶发酵条件下,重组酶EXPA的酶活为257380 RFU/h。生物信息学分析的结果显示,该酶属于天冬氨酸蛋白酶A1A家族。酶学性质的研究表明,该重组酶的最适反应温度和pH分别为50℃和3.0;分别在40～50℃或pH 2.5～3.5孵育1 h后,仍能保留80%左右的活力。Zn2+、Ca2+、Fe2+和Mn2+对其活性有一定的促进作用;而Cu2+、Co2+、Fe3+、EDTA和SDS则对其活性有显著的抑制作用。此外,重组酶EXPA对大豆分离蛋白、水溶性玉米蛋白和小麦水解蛋白均具有较好的水解作用。较好的耐热性和pH稳定性为EXPA在食品、饲料等领域的应用奠定了基础。
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