目的 探讨细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)-丝裂素活化蛋白激酶(MAPK)信号转导通路在胃泌素促进人结直肠癌细胞株HT-29增殖与凋亡中的作用及其机制.方法 体外培养结直肠癌HT-29细胞株,将细胞分为对照组、胃泌素组、丙谷胺组和胃泌素+丙谷胺组,胃泌素组设6.25、12.50、25.00、50.00、100.00 mg/L 5个浓度梯度,丙谷胺组设8.00、16.00、32.00、64.00、128.00 mg/L 5个浓度梯度,并设胃泌素(25.00 mg/L)+丙谷胺组(8.00、16.00、32.00、64.00、128.00 mg/L)浓度梯度.对照组不加药,其余各组加不同浓度的药物处理.运用MTT法观察细胞增殖活力改变情况,确立5-肽胃泌素和丙谷胺处理HT-29细胞的最佳浓度；流式细胞仪检测各组细胞增殖指数及凋亡率的变化；RT-PCR检测结直肠癌HT-29细胞株胃泌素/胆囊收缩素B受体(CCK-BR)mRNA表达情况以及各组细胞ERK1/2、K-rasmRNA表达水平的变化；Western blot检测ERK1/2和K-ras蛋白表达及其磷酸化水平.采用方差分析和SNK-q检验进行统计学分析.结果 胃泌素浓度在6.25～ 100.00 mg/L能促进结直肠癌HT-29细胞的增殖,且当浓度达25.00 mg/L时为最佳浓度(F=31.36,P＜0.05)；单独丙谷胺对结直肠癌HT-29细胞增殖无明显影响,但丙谷胺浓度在8.00 ～ 128.00 mg/L能明显拮抗胃泌素促进HT-29细胞的增殖作用,其最佳浓度为32.00 mg/L(F =24.31,P＜0.05).胃泌素(25.00 mg/L)组细胞增殖指数为37.5％±5.2％,显著高于对照组的27.7％±5.0％和胃泌素(25.00 mg/L)+丙谷胺(32.00 mg/L)组的27.3％±5.8％(q=4.56,4.75,P＜0.05)；胃泌素(25.00 mg/L)组细胞凋亡率为1.9％±0.4％,低于对照组的2.5％±0.4％和胃泌素(25.00 mg/L)+丙谷胺(32.00 mg/L)组的2.4％±0.3％(q＝4.23,4.06,P＜0.05).HT-29细胞中存在明显的CCK-BR mRNA表达.胃泌素(25.00 mg/L)组磷酸化ERK1/2、磷酸化K-ras蛋白相对表达量分别为0.43％±0.04％和0.45％±0.06％,高于对照组的0.32％±0.02％和0.31％±0.05％(q =7.78,4.95,P＜0.05),也高于胃泌素(25.00 mg/L)+丙谷胺(32.00 mg/L)组的0.36％±0.01％和0.35％±0.04％(q=5.72,4.08,P＜0.05)；但对照组、胃泌素(25.00 mg/L)组、丙谷胺(32.00 mg/L)组、胃泌素(25.00 mg/L)+丙谷胺(32.00 mg/L)组间ERK1/2 mRNA和蛋白表达水平以及K-ras mRNA和蛋白表达水平比较,差异均无统计学意义(F=0.52,0.72,0.78,0.28,P＞0.05).结论 胃泌素可以促进结直肠癌细胞株HT-29的增殖,抑制细胞凋亡,其作用可能是通过ERK-MAPK信号通路中Ras→ Raf→ MEK1/2→ERK1/2途径上调ERK和K-ras的磷酸化水平来实现的,但能够被其受体拮抗剂丙谷胺抑制。
ERK-MAPK信号转导通路在胃泌素促进人结直肠癌细胞增殖中的作用及其机制
【摘 要】
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目的 探讨细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)-丝裂素活化蛋白激酶(MAPK)信号转导通路在胃泌素促进人结直肠癌细胞株HT-29增殖与凋亡中的作用及其机制.方法 体外培养结直肠癌HT-29细胞株,将细胞分为对照组、胃泌素组、丙谷胺组和胃泌素+丙谷胺组,胃泌素组设6.25、12.50、25.00、50.00、100.00 mg/L 5个浓度梯度,丙谷胺组设8.00、16.00、32.00、64.00、1
【机 构】
：
241001芜湖,皖南医学院弋矶山医院胃肠二科,215006苏州大学附属第一医院普通外科,241001芜湖,皖南医学院弋矶山医院胃肠二科,241001芜湖,皖南医学院弋矶山医院胃肠二科,241001芜
【出 处】
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中华消化外科杂志
【发表日期】
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2013年12期
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