【摘 要】
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目的观察骨保护素(OPG)基因修饰的自体骨髓基质细胞(BMSCs)联合细胞移植技术促进Beagle犬牙周组织再生的情况,为探索基因治疗牙周病提供依据。方法将真核分泌表达穿梭载体pSe
【机 构】
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安徽医科大学附属口腔医院口腔内科,安徽口腔疾病研究省级实验室
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目的观察骨保护素(OPG)基因修饰的自体骨髓基质细胞(BMSCs)联合细胞移植技术促进Beagle犬牙周组织再生的情况,为探索基因治疗牙周病提供依据。方法将真核分泌表达穿梭载体pSecTag2/B-opg瞬时转染第3代自体犬BMSCs后,采用免疫化学和Westernblot的方法检测OPG蛋白的表达,倒置相差显微镜和扫描电镜观察转染后的BMSCsOPG在聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)支架上的黏附、聚集情况。选用4只成年Beagle犬,将其下颌双侧第2、3、4前磨牙作为实验牙,在每颗牙的颊侧构建牙槽骨缺损4mm×4mm×3mm,并随机分为4组,即BMSCsOPG-PLGA(转染后细胞复合支架组)、BMSCs-PLGA(未转染细胞复合支架组)、PLGA(支架对照组)、空白对照组。术后6周处死动物,组织学观察,测量新生牙槽骨(NB)、新生牙骨质高度(NC)、新生结缔组织的附着(CT)量。测量结果以SPSS15.0软件包进行q检验。结果免疫细胞化学和Westernblot鉴定结果证实,转染细胞内有OPG蛋白的高表达。扫描电镜显示BMSCs可以在材料表面、孔洞中良好地黏附、迁移,术后6周组织学观察可见转染后细胞复合支架组新生牙槽骨接近正常骨结构;未转染细胞复合支架组可见少量新生牙槽骨,胶原纤维丰富;支架对照组和空白对照组无明显硬组织形成。新生组织测量结果显示:转染后细胞复合支架组NB、NC、CT较对照组均显著增加(P<0.05)。结论 BMSCsOPG-PLGA细胞支架复合物联合细胞移植技术能显著促进犬牙周缺损的组织再生,为基因治疗联合组织工程治疗牙周缺损提供可能性。
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