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背景与目的已有的研究表明:Toll样受体5(toll-like receptor 5,TLR5)在肿瘤起始和发展中发挥重要作用。我们前期研究发现,TLR5在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)组织中高表达,但其在NSCLC高表达后的信号通路活化情况的研究并不多见。本研究旨在探讨TLR5在不同NSCLC细胞株上的表达,及其在NSCLC细胞中活化的机制。方法用免疫荧光、RT-PCR和Western blot方法检测TLR5在三种不同NSCLC细胞株中的表达。分别用0μg/m L、0.01μg/m L、0.1μg/m L、1μg/m L、5μg/m L、10μg/m L的鞭毛蛋白刺激,用NF-κB荧光素酶报告基因质粒瞬时转染后,检测细胞内NF-κB荧光素酶的活性。选择TLR5表达最高的SPC-A-1细胞株为实验对象,选择0.1μg/m L的鞭毛蛋白,分别用0μg/m L、0.01μg/m L、0.1μg/m L、1μg/m L、10μg/m L的TLR5抗体抑制通路活化,检测细胞内NF-κB荧光素酶的活性,验证TLR5活化通路。构建TLR5-sh RNA,转染SPC-A-1细胞48 h后,以0.1μg/m L浓度鞭毛蛋白分别刺激SPC-A-1细胞及转染的SPC-A-1细胞,在刺激0 min、10 min、30 min、60 min,用Western blot方法比较TLR5信号通路因子p-IKBα、p-ERK1/2、p-JNK、IKBα、ERK1/2的变化。结果 TLR5在肺腺癌细胞株SPC-A-1中呈高表达,且主要表达在细胞膜上。三种细胞株中SPC-A-1细胞NF-κB荧光素酶的活性最高,呈浓度依赖性,0.1μg/m L鞭毛蛋白即可明显增强NF-κB荧光素酶的活性(P<0.05);而SPC-A-1细胞内NF-κB荧光素酶的活性可被TLR5抗体抑制,与TLR5抗体浓度负相关(P<0.05)。与0 min相比较,SPC-A-1细胞内p-IKBα、p-ERK1/2、p-JNK水平在鞭毛蛋白刺激10 min即明显增高,30 min达到高峰,60 min开始下降(P<0.05),且与10 min和60 min组相比,p-IKBα、p-ERK1/2、p-JNK水平在30 min增高(P<0.05);而IKBα、ERK1/2的水平无明显变化(P>0.05)。以适合浓度鞭毛蛋白刺激转染的SPC-A-1细胞,p-IKBα、p-JNK蛋白均未检出,IKBα、ERK1/2蛋白的水平无明显变化(P>0.05),p-ERK1/2蛋白水平随着时间延长明显增高(P<0.05)。结论外源性配体鞭毛蛋白可激活NSCLC细胞株TLR5蛋白,启动下游信号通路,可能与NSCLC的发生发展有关。