果蝇唾液腺特异基因CG8419多克隆抗体的制备及检测

• 作 者: 周煌 唐雄卓 闵璐 陈婷芳 彭夕洋 王琨 吴秀山 王跃群
• 机 构: 湖南师范大学蛋白质化学及鱼类发育生物学教育部重点实验室心脏发育研究中心
• 出 处: 生命科学研究
• 发表日期: 2011年2期
• 关键词: CG8419 原核表达 多克隆抗体 CG8419 prokaryotic expression polyclonal antibody
• 基金项目: 国家自然科学基金资助项目（30871340 31071999 90508004 30930054）, 国家重点基础研究发展计划资助项目（2005CB522505）

果蝇CG8419基因与脊椎动物中TRIM45基因为同源基因.以果蝇cDNA为模板通过PCR扩增出亲水性和特异性好的果蝇CG8419基因片段,将其克隆入表达载体PET-28a,构建出重组表达质粒PET-28a-CG8419.将重组质粒转化大肠杆菌Rosetta,经IPTG诱导出带His标签的重组融合蛋白.通过尿素洗涤包涵体并切胶回收纯化融合蛋白,然后再免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体.Western blot实验分别验证抗体的效价和特异性.果蝇胚胎抗体染色显示该基因在果蝇唾液腺中表达.