【摘 要】
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目的 分离根尖牙乳头干细胞(stem cells from apical papilla,SCAP)来源的外泌体(exosomes,EXO),探讨SCAP来源的EXO联合成纤维细胞生长因子-2(fibroblast growth factor-2,FGF-2)对人牙髓干细胞生长活性与牙源性分化的影响.方法 取正畸患者拔除的根尖孔未闭合的第三磨牙,收集根尖牙乳头,培养SCAP;采用流式细胞术检测SCAP表面标志物CD29、CD31、CD34、CD44、CD45、CD90抗体表达情况;采用茜素红染色观察SCA
【机 构】
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新疆医科大学第五附属医院口腔科,新疆维吾尔自治区乌鲁木齐 830011
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目的 分离根尖牙乳头干细胞(stem cells from apical papilla,SCAP)来源的外泌体(exosomes,EXO),探讨SCAP来源的EXO联合成纤维细胞生长因子-2(fibroblast growth factor-2,FGF-2)对人牙髓干细胞生长活性与牙源性分化的影响.方法 取正畸患者拔除的根尖孔未闭合的第三磨牙,收集根尖牙乳头,培养SCAP;采用流式细胞术检测SCAP表面标志物CD29、CD31、CD34、CD44、CD45、CD90抗体表达情况;采用茜素红染色观察SCAP成骨能力,油红O染色观察SCAP成脂能力.采用超速离心法提取SCAP来源EXO,应用透射电镜观察EXO形态,采用Western blot法检测EXO特异性标志蛋白CD9、CD63、CD81、TSG101阳性表达情况.取人牙髓干细胞分为SCAP-EXO组、FGF-2组、SCAP-EXO+FGF-2组、对照组,SCAP-EXO组加入 10 mg/L SCAP 来源 EXO,FGF-2组加入50μg/L FGF-2,SCAP-EXO+FGF-2组加入10 mg/L SCAP来源EXO和50 μg/L FGF-2,对照组正常培养不进行任何处理,培养14 d后,采用CCK-8法检测各组细胞增殖率,采用比色法测定各组细胞碱性磷酸酶活性,采用茜素红染色观察各组细胞成骨能力,采用Western blot法检测各组细胞成骨分化相关标志物DSPP、OPN、BSP、OCN蛋白相对表达量.结果 SCAP表面标志物CD29、CD44、CD90抗体均呈阳性表达,CD31、CD34、CD45抗体均呈阴性表达,茜素红染色的SCAP内可见明显的红色至暗红色沉淀,有钙结节形成;油红O染色的SCAP内可见明显红色脂滴染色团块,有成脂分化,SCAP细胞分离成功;透射电镜可见SCAP外泌物呈杯状或球形囊泡,直径为40～100 nm,粒径峰值为50 nm;EXO标志蛋白CD9、CD63、CD81 和 TSG101 均表达阳性,SCAP-EXO分离成功.SCAP-EXO+FGF-2组[(138.14±12.46)％、13.44±1.23]、FGF-2组[(120.47±11.79)％、10.69±1.03]、SCAP-EXO组[(119.68±10.95)％、11.54±1.10]细胞增殖率、碱性磷酸酶活性均高于对照组[(100.00±9.64)％、7.36±0.58](P＜0.05),SCAP-EXO+FGF-2组均高于 FGF-2组、SCAP-EXO组(P＜0.05).茜素红染色的SCAP-EXO组、FGF-2组、SCAP-EXO+FGF-2组细胞内布满红色至暗红色结节块,颜色较深,数量较对照组增多;SCAP-EXO+FGF-2组内红色至暗红色结节块数量多于SCAP-EXO组、FGF-2组.SCAP-EXO组(0.45±0.04、0.74±0.06、0.28±0.02、0.41±0.03)、FGF-2组(0.47±0.04、1.17±0.10、0.30±0.03、0.45±0.04)、SCAP-EXO+FGF-2组(1.24±0.11、1.27±0.12、1.18±0.11、1.22±0.10)DSPP、OCN、OPN、BSP 蛋白相对表达量均高于对照组(0.08±0.01、0.29±0.02、0.04±0.00,0.27±0.02)(P＜0.05),SCAP-EXO+FGF-2组高于SCAP-EXO组、FGF-2组(P＜0.05).结论 SCAP-EXO联合FGF-2可增加人牙髓干细胞的生长活性,促进牙源性分化.
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