HZF1在大肠杆菌中的表达及多克隆抗体的制备

• 作 者: 彭瀚 张昕 杜占文 张俊武
• 机 构: 中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室
• 出 处: 中国医学科学院学报
• 发表日期: 2007年6期
• 关键词: HZF1基因 原核表达 亲和纯化 抗体 HZF1 gene prokaryotic expression affinity purification
• 基金项目: 国家高技术研究发展计划项目（863项目）（2002AA223071）、国家重大基础研究前期研究专项（2002CCA04300）和国家自然科学基金（30421003）

目的在大肠杆菌中表达HZF1融合蛋白，制备抗HZF1抗体。方法构建包含编码HZF1非锌指区DNA的重组表达质粒pET30a—HZF1，转化大肠杆菌并用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导表达相应的融合蛋白，采用镍柱纯化。以纯化蛋白作为免疫抗原，对新西兰大白兔实施多次免疫（间隔时间分别为3、2和2周）。用ELISA和Western blot检测抗体效价和特异性。结果获得兔抗HZF1抗体，经过ELISA检测，效价在1：100000以上。Western blot显示兔抗HZF1抗体能够特异性检测氯高铁血红素诱导的K