人DNMT3A基因慢病毒载体构建及其乳腺癌细胞MDA-MB-231稳定表达株的建立

• 作 者: 张慧变 王媛 于林
• 机 构: 天津医科大学
• 出 处: 山东医药
• 发表日期: 2017年42期
• 关键词: DNMT3A基因 慢病毒载体 MDA-MB-231细胞 乳腺癌 DNM33A gene lentiviral vector MDA-MB-231 cells b

目的构建人类DNA甲基转移酶3A（DNMT3A）蛋白过表达慢病毒载体并建立乳腺癌细胞MDA-MB-231稳定表达株。方法从乳腺癌细胞MDA-MB-231中提取总RNA,逆转录出含DNMT3A的c DNA;以DNMT3A的c DNA为模板,根据其CDS序列设计含有EcoRⅠ和Bam HⅠ限制性内切酶位点的引物序列,采用PCR法扩增出带有双酶切位点的目的基因;采用双酶切法将目的片段连接到到慢病毒表达质粒pLVX-IRES-Hyg中,获得重组的pLVX-FLAG-DNMT3A表达载体。重组的pLVX-FLAG-