【摘 要】
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目的探讨人体外泌汗腺组织体外三维培养方法,并对构建的三维组织进行形态学分析。方法取整形手术患者自愿捐赠的正常腹部全层皮肤,经Ⅱ型胶原酶消化分离人体外泌汗腺组织,以
【机 构】
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汕头大学医学院第二附属医院烧伤整形显微外科,
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目的探讨人体外泌汗腺组织体外三维培养方法,并对构建的三维组织进行形态学分析。方法取整形手术患者自愿捐赠的正常腹部全层皮肤,经Ⅱ型胶原酶消化分离人体外泌汗腺组织,以含5 ng/mL重组人EGF、25 mg/mL牛垂体提取物、100 U/mL青霉素和100μg/mL链霉素的无血清角质细胞培养基进行培养。倒置相差显微镜下观察细胞生长情况。待原代细胞达80%融合后,调整细胞浓度至1×105个/mL;取0.3 mL细胞悬液与0.3 mL Matrigel基底膜基质混匀培养,倒置相差显微镜下观察细胞生长情况。培养14 d后,取标本行冰冻切片,HE染色观察细胞形态结构,免疫组织化学染色检测细胞角蛋白7(cytokeratin 7,CK7)和CK19抗原表达。结果倒置相差显微镜观察示,经Ⅱ型胶原酶消化后大量汗腺组织游离;贴壁后3~5 d长出汗腺细胞,细胞持续分裂达2~3周,形成围绕汗腺组织块的环状单层;3~4周后细胞衰老。汗腺细胞接种于Matrigel基底膜基质中2~3 d,细胞开始分裂,随后形成小细胞团、管状结构以及类球状结构;约2周时混合培养物开始液化,培养终止。HE染色示部分细胞形成中空管状结构,管壁由1~2层细胞构成,类似于在体汗腺的分泌部和导管部;免疫组织化学染色见培养的汗腺细胞CK7和CK19表达均呈阳性。结论人汗腺细胞接种于Matrigel基底膜基质三维培养,形成的组织结构模拟了在体汗腺的组织形态结构。
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