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背景:同种异体软骨移植存在局部免疫排斥反应,有必要进一步减少其排斥反应,以促进软骨修复的临床应用,为此进行一系列局部免疫豁免诱导的实验很有意义。目的:观察FasL基因重组逆转录病毒载体转染软骨细胞形成同种异体组织工程化软骨在体内生长情况。设计:随机对照观察。单位:上海交通大学。材料:选用36只同种异体新西兰兔为受者,45只新生1周龄青紫蓝兔为供者,雌雄均不限。购自中国科学院实验动物研究中心。双嗜性逆转录病毒包装细胞系PT67购自Clontech公司;细胞培养基DMEM、胎牛血清、G418、Polybrene购自GIBCO BRL。方法:实验于2000-01/2005-07在原上海第二医科大学完成。摸球法随机将新西兰兔分为3组:同种异体软骨细胞-FasL组、同种异体软骨细胞组及空白组。每组各12只。利用重组逆转录病毒载体转染的青紫蓝兔软骨细胞和组织工程材料pluronic F-127复合物构建兔同种异体组织工程软骨。①移植物观察其大体观察与质量变化:各组均将相应材料注入新西兰白兔的皮下,移植接种后1,2,3个月取出移植物观察其大体观察与质量变化。②染色观察:移植接种后1,2,3月取出移植物,切片,行苏木精-伊红、Safranin’O、Masson’s trichrome染色观察。③抗体检测:移植接种后1,2月抽血1mL,将青紫蓝兔的软骨细胞用裂解液冻融裂解作为混合抗原,于琼脂糖介质中电泳分离,与受者新西兰兔血清作用,观察有无相应抗体产生。④补体依赖细胞毒实验:将青紫蓝兔的软骨细胞制备成2×109L-1的细胞悬液,接种于96孔板上,贴壁生长24h,加受者新西兰兔血清进行细胞毒试验,在显微镜下计数凋亡细胞的百分率。主要观察指标:①两组移植物的大体观察与质量变化。②组织学变化。③抗体检测结果。④凋亡细胞的百分率。结果:纳入实验兔81只均进入结果分析。①移植物的大体观察与质量变化:接种2周后,同种异体软骨细胞-FasL组及同种异体软骨细胞组兔接种细胞-材料复合物处,均有明显的结节形成,对照组未形成接节。同种异体软骨细胞组新生软骨组织随时间推移有逐渐缩小的趋势,并在第4个月后完全消失。同种异体软骨细胞-FasL组虽也有缩小的趋势,但7个月后尚存。同种异体软骨细胞-FasL组移植物质量高于同种异体软骨细胞组(P<0.05)。②组织学观察:同种异体软骨细胞组软骨组织周围可见大量的淋巴细胞浸润,同种异体软骨细胞-FasL组明显减少。软骨细胞内部,未见淋巴细胞侵入。麦松染色,光镜下观察,中部小部分白色为未成熟的软骨细胞,大部分成熟软骨细胞周围有染成绿色的胶原分泌。Safranin’O染色呈强阳性反应,表明基质中富含糖胺多糖。③抗体检测:将青紫蓝兔的软骨细胞用裂解液冻融裂解作为混合抗原,与受者新西兰兔血清作用,显示相应无抗体产生。④凋亡细胞的百分率:结果同种异体软骨细胞-FasL组、同种异体软骨细胞组及空白组血清CDC凋亡细胞的百分率分别为5%,6%和1%,均为阴性。结论:FasL基因重组逆转录病毒载体转染的软骨细胞能形成组织工程软骨,且能延迟退化3个月。