【摘 要】
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目的:建立非小细胞肺癌奥希替尼耐药细胞株H1975AR,对亲本和耐药细胞株进行鉴定,探讨耐药机制.方法:在体外采用浓度递增的方法予奥希替尼处理诱导H1975细胞建立奥希替尼耐药
【机 构】
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南京医科大学第二附属医院肿瘤医学中心,江苏南京21001l
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目的:建立非小细胞肺癌奥希替尼耐药细胞株H1975AR,对亲本和耐药细胞株进行鉴定,探讨耐药机制.方法:在体外采用浓度递增的方法予奥希替尼处理诱导H1975细胞建立奥希替尼耐药细胞株H1975AR;光镜及Giemsa染色比较2种细胞形态学差异;第二代测序(next generation sequencing,NGS)检测表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)基因突变;磺酰罗丹明B (sulforthodamineB,SRB)法检测细胞增殖,评估细胞对EGFR-酪氨酸激酶抑制剂(tyrosine kinase inhibitor,TKI)和化疗药的敏感性;分别予0、10、100、1 000 nmol/L奥希替尼处理6h,Western blot法检测EGFR及下游增殖信号的变化.结果:①SRB法测得H1975AR的耐药指数为3 634.75,显示H1975AR是奥希替尼耐药细胞株;②耐药细胞株形态发生改变且核浆比增大;③与H1975相比,给予奥希替尼处理对H1975AR的p-EGFR和p-ERK抑制作用不明显,且相同的给药浓度对H1975AR的p-AKT抑制作用较弱,同时下调c-Met的表达;④H1975和H1975AR对第一代EGFR-TKI耐药,对顺铂和紫杉醇敏感.结论:H1975AR细胞EGFR C797S顺式突变的产生是奥希替尼主要耐药机制,并对顺铂和紫杉醇敏感.
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