【摘 要】
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目的：构建幽门螺杆菌cag4蛋白的原核重组体系,表达、纯化融合蛋白。方法：利用PCR技术从幽门螺杆菌NCTC11637中克隆了cag4基因;经T-A克隆,酶切鉴定,构建了原核表达载体pET-28a-c
【机 构】
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江苏大学附属人民医院检验科,江苏大学基础医学与医学技术学院病原生物学研究室
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目的：构建幽门螺杆菌cag4蛋白的原核重组体系,表达、纯化融合蛋白。方法：利用PCR技术从幽门螺杆菌NCTC11637中克隆了cag4基因;经T-A克隆,酶切鉴定,构建了原核表达载体pET-28a-cag4;经测序鉴定正确后,转化进入大肠埃希菌BL21（DE3）进行异源表达。利用IPTG体外诱导后,经SDS-PAGE和Western bolt鉴定目的蛋白表达后,采用Ni2＋-NTA柱在变性条件下纯化目的蛋白,并对重组蛋白进行透析复性处理。将SDS煮沸法获得的溶壁微球菌肽聚糖掺入SDS-PAGE作为底物,进
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