人T细胞受体ζ链基因在昆虫细胞中的表达

• 作 者: 韩扬 周春霞 马文波 王冬梅 张叔人
• 机 构: 中国协和医科大学中国医学科学院肿瘤研究所免疫室
• 出 处: 中国肿瘤生物治疗杂志
• 发表日期: 2003年2期
• 关键词: T细胞受体 ζ链基因 昆虫细胞 表达 杆状病毒 TCR ζ chain baculovirus insect cell

目的:克隆人T细胞受体(TCR)ζ链基因,运用昆虫杆状病毒系统表达该蛋白.方法:用RT-PCR从人外周血单个核细胞(PBMC)中克隆TCRζ链cDNA,构建到昆虫杆状病毒系统专用的Transfer载体中,并与杆状病毒共转染昆虫sf9细胞.用SDS-PAGE电泳和用小鼠抗人ζ链蛋白的单抗在流式细胞仪中鉴定重组蛋白的表达.结果:克隆的人TCRζ链cDNA插入昆虫杆状病毒载体,并在昆虫sf9细胞中特异地表达了蛋白.表达量约为细胞裂解上清液总蛋白的11%.经SDS-PAGE分析,其分子量大小与预期的重组ζ链蛋白一