【摘 要】
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目的:探讨肿瘤特异性人端粒酶反转录酶(hTERT)启动子调控的人钠碘同向转运体(hNIS)的特异性抗肿瘤作用。方法:将质粒pcDNA3.1-CMV-hNIS中的hNIS cDNA亚克隆至含hTERT核心启动
【机 构】
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上海交通大学医学院附属瑞金医院核医学科;
【基金项目】
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国家自然科学基金(81071181);上海市卫生局青年基金(2010Y021);上海交通大学医学院校基金(YZ1071)
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目的:探讨肿瘤特异性人端粒酶反转录酶(hTERT)启动子调控的人钠碘同向转运体(hNIS)的特异性抗肿瘤作用。方法:将质粒pcDNA3.1-CMV-hNIS中的hNIS cDNA亚克隆至含hTERT核心启动子的质粒载体pGL3-hTERT-luc中,以构建质粒pGL3-hTERT-hNIS,并以质粒pGL3-hTERT-luc及pcDNA3.1-CMV-hNIS分别作为阴性对照及阳性对照,然后采用脂质体将其转染至人胚肺成纤维细胞MRC-5及肿瘤细胞HeLa、A549和U87中,采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测hNIS mRNA水平;免疫细胞化学法及流式细胞术(FCM)检测hNIS蛋白的表达情况;摄碘实验验证hNIS蛋白的功能;同时采用MTT观察131I的细胞杀伤作用。结果:成功构建质粒pGL3-hTERT-hNIS,转染4种细胞后,3种肿瘤细胞的hNIS mRNA水平明显高于MRC-5细胞(P<0.05)。3种肿瘤细胞均可表达hNIS蛋白,而MRC-5细胞不表达。与Na125I孵育30 min时HeLa、A549和U87细胞的摄碘量分别是阴性对照组的25倍、20倍和18倍。131I照射7 h后,3种肿瘤细胞的相对存活率显著下降(P<0.05)。结论:hTERT启动子调控hNIS基因在肿瘤细胞中特异性表达,这些细胞可特异性摄碘并被其有效杀伤,为行进一步体内实验奠定基础。
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