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大叶紫花苜蓿下胚轴诱导的愈伤组织在继代培养基上生长快速，易于分散。继代第１２ｄ的愈伤组织原生质体的得率为６．５×１０＾７／ｇ鲜重。原生质体培养基为ＳＨ基本培养基，含有１．０ｍｇ／Ｌ２，４－Ｄ、０．５ＭＧ／Ｌ ＢＡ、２．０ｇ／Ｌ ＣＨ、２％蔗糖、６％葡萄糖、５ｍｍｏｌ／Ｌ ＭＥＳ，培养密度为１．０×１０＾５／ｍＬ。培养至第１２ｄ时的原生质体再生细胞植板率为３．７％。由原生质体形成的小愈伤组织在含２．