超滤法结合UPLC测定抗601合剂中黄芩苷、绿原酸在不同血浆中的蛋白结合率

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目的超滤法结合超高效液相色谱(UPLC)法同时检测抗601合剂中2种指标性成分——黄芩苷、绿原酸体外血浆蛋白结合率。方法建立UPLC法同时测定牛血清白蛋白(BSA)、大鼠空白血浆和正常人空白血浆超滤液中的黄芩苷、绿原酸含量,进行专属性、精密度、准确度、稳定性、超滤膜回收率等方法学考察;配制黄芩苷质量浓度分别为28.2、141.0、282.0 mg/L,绿原酸质量浓度为6.40、32.0、64.0 mg/L的抗601合剂溶液,分别与BSA溶液、大鼠空白血浆、人空白血浆混匀后,置于37℃水浴温育4 h,于超滤离心管中10 000 r/min离心20 min,取超滤液10μL注入UPLC分析测定,计算超滤液中黄芩苷和绿原酸浓度及血浆蛋白结合率。结果建立的UPLC法专属性、精密度、准确度、稳定性、超滤膜回收率均良好,能够满足定量分析测试要求;黄芩苷与BSA、大鼠空白血浆和正常人空白血浆的蛋白结合率分别为(73.70±1.65)%、(82.72±1.64)%、(87.33±1.84)%,绿原酸与3种血浆的蛋白结合率分别为(66.78±1.91)%、(74.18±2.01)%、(78.54±2.97)%,无浓度相关性,两成分与BSA溶液蛋白结合率显著低于与大鼠空白血浆、人空白血浆结合率(P<0.05)。结论抗601合剂中的黄芩苷、绿原酸与不同种属血浆均有较高的蛋白结合率,在考察范围内无浓度相关性,归类于中速处置类药物,体内消除情况与其血浆蛋白结合率可能密切相关。
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