【摘 要】
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目的:探讨Pax3的过表达对Neuro-2a细胞中转录本的表达影响,初步分析Pax3对Neuro-2a细胞可能的转录调控作用.方法:反复冻融裂解法获取Pax3过表达腺病毒后将神经瘤母细胞系Neur
【机 构】
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深圳北京大学香港科技大学医学中心生物医学研究所 广东深圳518000
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目的:探讨Pax3的过表达对Neuro-2a细胞中转录本的表达影响,初步分析Pax3对Neuro-2a细胞可能的转录调控作用.方法:反复冻融裂解法获取Pax3过表达腺病毒后将神经瘤母细胞系Neuro-2a传代培养,而后将Pax3过表达腺病毒和传代培养后的Neuro-2a细胞加入到同一培养皿中,蛋白质免疫印迹(Western blot)检测过表达Pax3蛋白的Neuro-2a细胞(Pax3过表达组)和对照组(NC组)Neuro-2a细胞的Pax3蛋白表达水平,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测Pax3过表达组和NC组Neuro-2a细胞的Pax3mRNA水平,Trizol法提取Pax3过表达组和NC组Neuro-2a细胞的总RNA,然后进行全转录本测序,最后将选出的有差异性的基因使用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)验证.结果:与NC组相比,Pax3过表达组的Pax3蛋白和Pax3mRNA表达水平明显升高(P＜0.05);Pax3过表达组中发现了1045个基因表达上调,1313个基因表达下调.通过qRT-PCR验证发现在Pax3过表达组中Nppb和Chrna5表达水平上升(P＜0.05),Arhgap5、Rock1、Rif1、Brca2、Prkg2和Stag2表达水平下降(P＜0.05).结论:Pax3过表达腺病毒感染Neuro-2a细胞后,其蛋白和mRNA表达水平均升高,Rock1、Rif1和Stag2可能作为Pax3的下游靶点参与调控Neuro-2a细胞周期和干细胞特性.
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