pPICZαA—CDK2重组质粒的构建及表达

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目的:构建含有细胞周期依赖性激酶2(CDK2)的胞外分泌型pPICZαA—CDK2重组质粒,利用毕赤酵母表达体系表达CDK2蛋白。方法:从人白细胞中提取总RNA,逆转录后采用聚合酶链反应扩增出CDK2基因.并将其插入pPICZαA质粒,构建重组质粒,化学法转化大肠杆菌JM109进行克隆。重组质粒pPICZαA—CDK2转化毕赤酵母茼株GS115,甲醇诱导酵母细胞进行蛋白表达,SDS—PAGE和Western—Blot鉴定蛋白表达情况及抗原性。结果:PCR电泳及DNA测序证实CDK2基因已正确克隆到表达载体
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