纤溶酶原激活物抑制物-1基因转导对肾小球系膜细胞外基质积聚的影响

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目的 利用体外基因转染技术使纤溶酶原激活物抑制物-1(PAI-1)基因过表达,直接观察局部PAI-1对大鼠系膜细胞外基质(ECM)积聚的影响,解析ECM积聚的分子机制。方法以绿色荧光蛋白(GFP)为报告基因,构建PAI-1/GFP融合基因真核表达载体,利用脂质体将外源PAI-1cDNA导入体外培养的大鼠系膜细胞。在活细胞状态下,动态观察外源基因的表达。用Northern杂交、ELISA方法检测大鼠系膜细胞纤维连接蛋白(FN)、层连蛋白(LN)及IV型胶原表达。结果PAI-1基因转染后,转染组大鼠系膜细胞中的培养上清PAI活性明显增高,到24小时达最高值(8.16±0.62)IU/ml,与对照组(2.27±0.19)IU/ml相比,差异有显著性(P<0.05)。同时基因转染组FN(0.51±0.03)、LN(1.26±0.07)及Ⅳ型胶原(0.98±0.08)水平均较对照组明显增高(P<0.05)。结论首次建立了系膜细胞PAI-1的过度表达体系,证实细胞过度表达PAI-1可以直接导致ECM的积聚。局部PA/PAI活性的变化可能是调节系膜细胞ECM积聚与降解的重要因素。

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