mRNA电转抗CD3抗体刺激的PBMC方法的建立

• 作 者: 胡愉 赵慧 王准 何维
• 机 构: 中国医学科学院基础医学研究所,北京协和医学院基础学院免疫学系医学分子生物学国家重点实验室,中国食品药品检定研究院病毒三室
• 出 处: 基础医学与临床
• 发表日期: 2014年6期
• 关键词: 信使RNA 电转 外周血单个核细胞 加强型绿色荧光蛋白 mRNA electroporation PBMC EGFP

目的建立信使RNA（mRNA）电转抗CD3抗体刺激的外周血单个核细胞（PBMC）的方法，为制备基因修饰CDR35移植型γδT淋巴细胞，为肿瘤细胞过继治疗提供新的技术方法。方法以5SeI内切酶消化重组pGEM4Z／EGFP／A64质粒，回收纯化线性化的重组质粒pGEM4Z／EGFP／A64，体外转录成mRNA；在电转参数为500V500μs、400V500μs或300V500μs等不同条件下，转染抗CD3抗体刺激的人PBMC；用倒置荧光显微镜观察和流式细胞仪观察和分析绿色荧光蛋白的表达；台盼蓝染色计算不同电