可溶性PyNPase的分离与纯化

• 作 者: 姜立春 阮期平 郭春艳 李先进
• 机 构: 绵阳师范学院分子生物学与生物制药重点实验室
• 出 处: 绵阳师范学院学报
• 发表日期: 2008年5期
• 关键词: 嘧啶核苷磷酸化酶 超声波法 分离纯化 磷酸化酶活性 PyNPase ultrasonic method isolation and purification

本实验对重组PyNPase基因工程茵诱导表达，超声波破碎后上清波进行了分离与纯化，采用革兰氏染色法观察和活茵计数法检测破碎效率。超声波破碎上清液经Ni-亲和层析进行分离纯化，最后用SDS—PAGE和磷酸化反应进行了鉴定。结果表明，高效表达的PyNPase重组茵，在工作5s，间歇5s，工作50min，破碎效率最佳。SDS—PAGE检测电泳纯度达到85％以上，条带模糊；分离获得的PyNPase能使尿苷磷酸化为尿嘧啶，具有磷酸化酶活性，但上清液中可溶性PyNPase的含量比较低。