【摘 要】
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目的 通过正交实验筛选肺炎链球菌4型菌株冷冻真空干燥工艺保护剂配方,并对该配方下菌种的活性、遗传稳定性以及生长特性进行分析,找到符合长期、稳定保存菌种要求的冻干保护
【机 构】
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华兰生物工程股份有限公司研发中心,河南新乡 453003;华兰生物工程股份有限公司血制研发部,河南新乡 453003;华兰基因工程有限公司质量控制部,河南新乡 453000
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目的 通过正交实验筛选肺炎链球菌4型菌株冷冻真空干燥工艺保护剂配方,并对该配方下菌种的活性、遗传稳定性以及生长特性进行分析,找到符合长期、稳定保存菌种要求的冻干保护剂配方.方法 以肺炎链球菌4型菌株为试验菌种,以菌种冻干前后存活率为评价指标,通过采用三因素正交试验确定冻干保护剂配方,冻干后对该配方下制备的菌种进行活性、遗传稳定性以及生长特性的分析.结果 通过正交实验确定最佳冻干保护剂配方为:5％脱脂奶粉+10％海藻糖+10％谷氨酸钠;冻干前菌液浓度为2.35×108 cfu/mL,冻干后菌种保存不同时间(冻干后,存放90、180、360 d)取样检测活性分别为:81.2％,80.4％,80.1％和79.8％,同源性分析为100％,生长特性无差异;该配方对6A、18C、19F型肺炎链球菌在冷冻真空干燥工艺下同样具有较好的保护性,三批样品0 d取样存活率均在78％以上.结论 冻干保护剂配方优化后使得菌种存活率以及稳定性都保持较高水平,并且该配方工艺可用于肺炎链球菌不同血清型菌株冷冻真空干燥保存,为肺炎链球菌多糖疫苗的生产提供稳定可靠的菌株.
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