【摘 要】
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试验旨在通过真核表达系统表达猪圆环病毒2型(porcine circovirus type 2,PCV2)CAP蛋白。以PCV2TZ0601株为模板,将PCV2CAP全基因及CAP去除信号肽的基因编码序列克隆至pOET3载
【机 构】
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天津瑞普生物技术股份有限公司,中国农业大学动物医学院
【基金项目】
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瑞普生物研究院动物疫病流行病学调查专项基金（RPBVI20130010）
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试验旨在通过真核表达系统表达猪圆环病毒2型(porcine circovirus type 2,PCV2)CAP蛋白。以PCV2TZ0601株为模板,将PCV2CAP全基因及CAP去除信号肽的基因编码序列克隆至pOET3载体上,酶切与测序鉴定正确后,将重组质粒pOET3-CAP及pOET3-CAP-X转染sf9昆虫细胞。采用flashBAC杆状病毒表达系统表达PCV2CAP及去除信号肽的CAP蛋白,通过间接免疫荧光法、SDS-PAGE和Western blotting鉴定目的蛋白的表达。结果表明,真核表达质粒pOET3-CAP及pOET3-CAP-X构建成功,目的基因在sf9昆虫细胞中高效表达,得到的蛋白经SDS-PAGE和Western blotting鉴定,在25~35ku处有蛋白条带,表达的蛋白质可被PCV2阳性血清识别。试验结果为进一步制备PCV2亚单位疫苗及诊断抗原试剂盒的研发奠定了基础。
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