【摘 要】
：
[目的]本试验旨在建立一个实时追踪山羊细胞自噬发生状况的工具,以探讨细胞自噬对睾丸支持细胞(SC)和生殖细胞的影响。[方法]通过PCR法扩增mCherry-EGFP-LC3基因序列1 884 bp
【机 构】
：
南京农业大学动物科技学院/江苏省家畜胚胎工程实验室,南京农业大学动物医学院
【基金项目】
：
江苏省自然科学基金项目（BK20161444）
论文部分内容阅读
[目的]本试验旨在建立一个实时追踪山羊细胞自噬发生状况的工具,以探讨细胞自噬对睾丸支持细胞(SC)和生殖细胞的影响。[方法]通过PCR法扩增mCherry-EGFP-LC3基因序列1 884 bp,将其导入真核表达载体pEX-3中,得到重组质粒pmCherry-EGFP-LC3;将pmCherry-EGFP-LC3及对照质粒p EX-3分别转染体外分离培养的山羊SC,饥饿处理12 h后用荧光显微镜观察融合蛋白在细胞中的表达,用RT-qPCR和Western blot检测细胞中自噬相关基因和蛋白表达变化,用透射电镜观察细胞自噬体的形成。[结果]成功构建了双荧光自噬报告载体,该载体能在山羊SC中表达,荧光显微镜下可见绿色荧光和红色荧光表达;饥饿处理后,该载体可以指示细胞中自噬泡的形成过程,且细胞自噬相关标记Beclin1 mRNA以及LC3Ⅱ/LC3ⅠmRNA比值和蛋白水平均显著上调,并能观察到初始自噬体的形成。[结论]获得的山羊SC可以作为后续试验的细胞模型;构建的双荧光pmCherry-EGFP-LC3自噬报告载体可为进一步研究山羊SC的自噬发生提供有效的工具。
其他文献
本文分析了城市规划工作中存在的主要问题，并对可持续发展观念下城市规划的工作提出了几点看法，供大家参考。
基于生态足迹模型,对德阳市耕地近10年来的生态足迹、生态承载力、生态赤字、脆弱性指数进行测算,再结合ArcGIS进行空间可视化表达,分析出其空间分布规律.结果表明:1)德阳市
中国与卡塔尔于1988年7月9日正式建交,开展工程承包始于90年代末。随着近年经济的快速增加,因住房紧张和为寻求商业利益,卡塔尔再度掀起建筑高潮,近十年来,随着中卡两国经贸
安全生产,一个老生常谈的话题,同时,又是一个刻不容缓的话题,犹在煤炭生产领域,安全生产的问题更是关乎每个人乃至每个各级领导敏感神经的大问题。我国是一个煤炭大国,每年的
本文简要介绍了在高职数学教学中的两个题目并整理给出了多种解法：化空间直线的一般式方程为直线的点向式方程和参数式方程，整理了三种解法；求通过某个已知点和已知直线的平面方
某大型挤压造粒机组的螺杆芯轴在运行过程中发生断裂。通过断口分析、金相检验、化学成分分析和力学性能测试等方法,对螺杆芯轴的断裂原因进行了分析。结果表明:螺杆芯轴发生
中国有70万个行政村,分布在960万平方公里的国土上。无论在高原、沙漠还是草原,它们中的99.98%都有公路连通。中国为什么能做到?1978年,中国至少一半行政村不通公路。但从那