【摘 要】
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目的基于微滴式数字PCR（ddRCR）技术建立EGFR-T790M突变检测方法，并对该方法进行系统性优化及评估。方法针对T790M突变，设计相关的探针引物，建立ddPCR反应体系，确立最佳退火温度并进行基本的性能验证。于2019年1至10月在山东第一医科大学附属肿瘤医院收集了72例NSCLC患者的循环游离DNA（cfDNA）样本并进行临床验证，利用Kappa检验分析与伯乐ddPCR产品的一致性。结
【机 构】
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山东第一医科大学附属肿瘤医院（山东省肿瘤防治研究院 山东省肿瘤医院）检验科，济南 250117,山东第一医科大学附属肿瘤医院（山东省肿瘤防治研究院 山东省肿瘤医院）检验科，济南 250117,山东第一
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目的基于微滴式数字PCR（ddRCR）技术建立EGFR-T790M突变检测方法，并对该方法进行系统性优化及评估。
方法针对T790M突变，设计相关的探针引物，建立ddPCR反应体系，确立最佳退火温度并进行基本的性能验证。于2019年1至10月在山东第一医科大学附属肿瘤医院收集了72例NSCLC患者的循环游离DNA（cfDNA）样本并进行临床验证，利用Kappa检验分析与伯乐ddPCR产品的一致性。
结果建立并优化ddPCR反应体系，线性评估示R2>0.99，空白检测限为突变微滴数目≥2，特异性良好，灵敏度分析示突变检测下限可达到0.05%，重复性及批间精密度变异系数（CV）<20%，准确度相对偏差在±10%范围内。对72例NSCLC患者的cfDNA样本进行验证，与伯乐ddPCR产品的一致性为91.67%（66/72，Kappa=0.749；P<0.001）。
结论应用ddPCR成功建立非小细胞肺癌EGFR-T790M突变检测方法。
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