【摘 要】
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目的通过重组表达的方法获得纯化的膜突蛋白(moesin),利用纯化的重组moesin作为抗原建立间接酶联免疫吸附实验(ELISA),检测并探讨抗膜突蛋白抗体与动脉粥样硬化相关疾病的关
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目的通过重组表达的方法获得纯化的膜突蛋白(moesin),利用纯化的重组moesin作为抗原建立间接酶联免疫吸附实验(ELISA),检测并探讨抗膜突蛋白抗体与动脉粥样硬化相关疾病的关系。方法设计针对moesin的引物,通过PCR扩增,得到moesin的编码DNA,构建出能够表达moesin的重组质粒,用异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)在适当温度和条件下诱导表达,通过SDS-PAGE电泳鉴定所表达的蛋白,并对重组蛋白进行纯化。利用纯化的重组moesin作建立间接ELISA,采用酶联免疫吸附试验检测120例动脉粥样硬化相关疾病(20例急性冠状动脉综合征、30例原发性高血压、20例颈动脉硬化、20例糖尿病及30例血脂异常症)患者血清抗膜突蛋白抗体,观察抗膜突蛋白抗体的阳性率。结果表达产物经SDS-PAGE电泳分析,确定所得表达产物为moesin;抗原的最佳包被浓度为4 mg/L,抗体的最佳稀释倍数为1∶100,酶标二抗的最佳稀释倍数是1∶20 000。在120例动脉粥样硬化相关疾病中,抗膜突蛋白抗体的阳性检出率较高,达25%～70%,显著高于正常对照组的5%(P<0.01);急性冠状动脉综合征组阳性检出率高达70%,高于其它疾病组(P<0.05),其它各亚型疾病组之间差异无显著性。结论成功地表达了重组人moesin;建立了最佳的重组moesin作为抗原检测抗膜突蛋白抗体的间接ELISA反应条件;抗膜突蛋白抗体在动脉粥样硬化相关疾病患者中有较高的检出率。
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