论文部分内容阅读
摘 要：建立柱前衍生化高效液相色谱法测定硫酸阿米卡星注射液中硫酸阿米卡星的含量。方法：采用奥泰公司C18色谱柱（220mm×4.6mm，5μm），甲醇-乙腈-水（30∶20：50）为水，检测波长为246nm，流速为1.0ml/min，柱温为30℃。硫酸阿米卡星在0.192～0.576mg·mL-1范围内呈良好的线性关系（r=0.9999）。硫酸阿米卡星平均回收率分别为99.6%。结论：本法简便、准确，可用于硫酸阿米卡星注射液中硫酸阿米卡星的含量测定。
关键词：硫酸阿米卡星；含量；测定
硫酸阿米卡星化学名称为0-3-氨基-3-脱氧-α-D-葡萄吡喃糖基-（1→6）-0-[6-氨基-6-脱氧-α-D-葡萄吡喃糖基-（1→4）]-N-（4-氨基-2-羟基-1-氧丁基）-2-脱氧-D-链霉胺硫酸盐。硫酸阿米卡星是一种氨基糖苷类抗生素，对大肠埃希菌、克雷伯菌属、肠杆菌属、变形杆菌属、志贺菌属、沙门菌属、枸橼酸杆菌属、不动杆菌属、耶尔森菌属均有抑制作用。硫酸阿米卡星适用于菌血症、心内膜炎、尿路感染、败血症、皮肤及软组织感染等[1-5]。本文采用柱前衍生化高效液相法对硫酸阿米卡星注射液中的硫酸阿米卡星的进行了含量测定。
1 仪器与试药
1.1 仪器：安捷伦1100高效液相色谱仪；安捷伦1100紫外检测器；瑞士梅特勒-托利多MS精密天平（梅特勒-托利多中国公司）；US6180DH数显型超声波清洗器（北京优晟联合科技有限公司）；TGL16台式高速冷冻离心机（上海东戈姆科贸发展有限公司）；XYB-H帕恩特普通分析级纯水机（北京湘顺源科技有限公司）；SLGH超深度高精度恒温槽（南京顺流仪器有限公司）；JTU-1901 双光束紫外可见分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司）。
1.2 色谱柱：奥泰公司C18色谱柱（220mm×4.6mm，5μm）。
1.3 对照品：硫酸阿米卡星。
1.4试剂：甲醇（湖北型银河化工有限责任公司）、醋酸钠（湖北型银河化工有限责任公司）、磷酸二氢铵（湖北型银河化工有限责任公司）、硼酸（成都东金化学试剂有限公司）、氯化钾（成都东金化学试剂有限公司）、三乙胺（济南金盈泰化工限有公司）、乙腈（济南金盈泰化工限有公司）、冰醋酸（济南金盈泰化工限有公司）、氢氧化钠（成都东金化学试剂有限公司）。
1.5 试药：硫酸阿米卡星注射液。
2 测定方法确定
2.1 色谱条件
依据查阅文献及考查的结果，确定色谱条件如下[6-13]。水：甲醇-乙腈-水（30∶20：50）为水，检测波长：246nm，流速：1.0ml·min-1。柱温：30℃。理论板数按硫酸阿米卡星衍生物峰计算应不得低于2000。
2.2 衍生化方法
取10μl对照品溶液或供试品溶液加硼酸盐缓冲溶液（PH值8.8）60μl，混匀，再加入AQC20μl，混匀。
2.3 对照品溶液的制备
精密称取硫酸阿米卡星对照品适量，置容量瓶中，加水制成每1mL含0.3mg的溶液，按衍生化方法处理，即得。
2.4 供试品溶液的制备
精密量取供试品适量，置具塞锥形瓶中，精密加入水20mL，密塞，精密称定重量，超声处理10分钟，放冷，精密称定，用水补足重量，摇匀，滤过，取续滤液，按衍生化方法处理，即得。
2.5 专属性试验
依照处方取除硫酸阿米卡星，按样品制备工艺制成阴性对照样品，照2.4项下供试品溶液的制备方法制成阴性液，依上述方法测定，结果在硫酸阿米卡星衍生物出峰处阴性液无色谱峰，结果阴性试验没有干扰，表明本方法专属性良好。
2.6 精密度试验
精密称取硫酸阿米卡星对照品适量，加水使溶解，制成浓度为0.3mg·mL-1的供试品溶液，按衍生化方法处理。照上述色谱条件，精密吸取10μl，连续进样6次，记录峰面积。结果，RSD=0.69%，表明本方法精密度良好。
2.7 对照品的线性考察
精密称取硫酸阿米卡星对照品16mg，置25ml容量瓶中，加入水使溶解并稀释至刻度，摇匀，分别精密吸取1.5、2.5、3.0、3.5、4.5mL，置于5mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。分别按柱前衍生化处理，精密上述溶液吸取10μL，注人液相色谱仪，依照2.1项下的色谱条件测定，记录色谱峰。以峰面积（Y）为纵坐标，对照品进样量（X）为横坐标，绘制标准曲线，计算回归方程。结果表明，硫酸阿米卡星在0.192～0.576mg·mL-1范围内呈良好的线性关系。
2.8 重现性试验
称取同一批的硫酸阿米卡星样品6份，按测定方法项下的方法制备供试品溶液，测定含量，并计算样品的RSD值，结果RSD为0.65%，结果表明此方法的重现性良好。
2.9 准确度试验
取对照品适量，精密称取已知含量的样品9份，置量瓶中，分别精密加入硫酸阿米卡星对照品，按项下方法制备成120%、140%、160%。取模拟样品照“含量测定”项下方法试验，计算回收率为99.6%，RSD为0.86%。
2.10 样品含量测定
依照上述含量测定方法，再按外标法以峰面积计算样品的含量，结果三批样品的含量分别为标示量的100.1%、99.9%、100.1%。
3 讨论
分别考察0.04moloL-1磷酸二氢铵溶液-乙腈-三乙胺（60∶40：0.01），0.27%磷酸二氢钾溶液（用2.2%的氢氧化钾溶液调节pH值至6.5）-甲醇（30：70），甲醇-水-冰醋酸（13∶86∶1），磷酸盐缓冲液（取0.05mol/L磷酸二氢钾溶液1000mL，加入三乙胺4mL，用磷酸调节pH值至6.5）-乙腈（90：10），甲醇-1%冰醋酸溶液（28∶72），[乙腈-四氢呋喃（25∶15）]-0.02%磷酸水溶液（35∶65），甲醇-乙腈-水（30∶20：50）不同比例的水，结果以甲醇-乙腈-水（30∶20：50）为水为水，供试品各峰分离效果最好，故选用甲醇-乙腈-水（30∶20：50）为水为水。本实验采用柱前衍生化高效液相色谱法效果好、方法简便、快捷、准确、专属性好，可用于硫酸阿米卡星注射液中硫酸阿米卡星的含量测定。
参考文献
[1]董烽.硫酸阿米卡星注射液的合理给药[J].西部医学，2006（6）.
[2]刁连生.阿米卡星的不良反应与合理应用[J].中国药事，2003（4）.
[3]王明仲.阿米卡星的临床应用研究进展[J].邯郸医学高等专科学校学报，2004（3）.
[4]安丽珠.阿米卡星抗生素后效应的临床应用[J].临床和实验医学杂志，2006（2）.
[5]张长法，李子贺，张胜林.硫酸阿米卡星治疗细菌感染性疾病152例临床分析[J].药品评价，2006（6）.
[6]何丹，杨林.柱后衍生化高效液相色谱法测定注射用硫酸阿米卡星[J].药物分析杂志，2009（6）.
[7]陈冠华，潘淑萍，胡江宁.硫酸阿米卡星含量及有关物质的HPLC-ELSD测定[J].中国医药工业杂志，2005（3）.
[8]张幸生，何丽芳，石东方.硫酸阿米卡星注射液含量的测定方法研究[J].时珍国医国药，2005（9）.
[9]王明娟，胡昌勤，金少鸿.硫酸阿米卡星注射液及有关物质的HPLC法分析[J].中国抗生素杂志，2001（5）.
[10]吴宏伟，王珑.HPLC-ELSD法测定硫酸阿米卡星的含量[J].中国药品标准，2007（3）.
[11]陈冠华，潘淑萍，胡江宁.硫酸阿米卡星含量及有关物质的HPLC-ELSD测定[J].中国医药工业杂志，2005（3）.
[12]高轶喆，侯常林，李玉兰.旋光度测定法测定硫酸阿米卡星注射液中主药的含量[J].中国药房，2005（23）.
[13]王建，王知坚，方翠凤.HPLC-ELSD法测定阿米卡星洗剂的含量[J].药物分析杂志，2009（6）.
关键词：硫酸阿米卡星；含量；测定
硫酸阿米卡星化学名称为0-3-氨基-3-脱氧-α-D-葡萄吡喃糖基-（1→6）-0-[6-氨基-6-脱氧-α-D-葡萄吡喃糖基-（1→4）]-N-（4-氨基-2-羟基-1-氧丁基）-2-脱氧-D-链霉胺硫酸盐。硫酸阿米卡星是一种氨基糖苷类抗生素，对大肠埃希菌、克雷伯菌属、肠杆菌属、变形杆菌属、志贺菌属、沙门菌属、枸橼酸杆菌属、不动杆菌属、耶尔森菌属均有抑制作用。硫酸阿米卡星适用于菌血症、心内膜炎、尿路感染、败血症、皮肤及软组织感染等[1-5]。本文采用柱前衍生化高效液相法对硫酸阿米卡星注射液中的硫酸阿米卡星的进行了含量测定。
1 仪器与试药
1.1 仪器：安捷伦1100高效液相色谱仪；安捷伦1100紫外检测器；瑞士梅特勒-托利多MS精密天平（梅特勒-托利多中国公司）；US6180DH数显型超声波清洗器（北京优晟联合科技有限公司）；TGL16台式高速冷冻离心机（上海东戈姆科贸发展有限公司）；XYB-H帕恩特普通分析级纯水机（北京湘顺源科技有限公司）；SLGH超深度高精度恒温槽（南京顺流仪器有限公司）；JTU-1901 双光束紫外可见分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司）。
1.2 色谱柱：奥泰公司C18色谱柱（220mm×4.6mm，5μm）。
1.3 对照品：硫酸阿米卡星。
1.4试剂：甲醇（湖北型银河化工有限责任公司）、醋酸钠（湖北型银河化工有限责任公司）、磷酸二氢铵（湖北型银河化工有限责任公司）、硼酸（成都东金化学试剂有限公司）、氯化钾（成都东金化学试剂有限公司）、三乙胺（济南金盈泰化工限有公司）、乙腈（济南金盈泰化工限有公司）、冰醋酸（济南金盈泰化工限有公司）、氢氧化钠（成都东金化学试剂有限公司）。
1.5 试药：硫酸阿米卡星注射液。
2 测定方法确定
2.1 色谱条件
依据查阅文献及考查的结果，确定色谱条件如下[6-13]。水：甲醇-乙腈-水（30∶20：50）为水，检测波长：246nm，流速：1.0ml·min-1。柱温：30℃。理论板数按硫酸阿米卡星衍生物峰计算应不得低于2000。
2.2 衍生化方法
取10μl对照品溶液或供试品溶液加硼酸盐缓冲溶液（PH值8.8）60μl，混匀，再加入AQC20μl，混匀。
2.3 对照品溶液的制备
精密称取硫酸阿米卡星对照品适量，置容量瓶中，加水制成每1mL含0.3mg的溶液，按衍生化方法处理，即得。
2.4 供试品溶液的制备
精密量取供试品适量，置具塞锥形瓶中，精密加入水20mL，密塞，精密称定重量，超声处理10分钟，放冷，精密称定，用水补足重量，摇匀，滤过，取续滤液，按衍生化方法处理，即得。
2.5 专属性试验
依照处方取除硫酸阿米卡星，按样品制备工艺制成阴性对照样品，照2.4项下供试品溶液的制备方法制成阴性液，依上述方法测定，结果在硫酸阿米卡星衍生物出峰处阴性液无色谱峰，结果阴性试验没有干扰，表明本方法专属性良好。
2.6 精密度试验
精密称取硫酸阿米卡星对照品适量，加水使溶解，制成浓度为0.3mg·mL-1的供试品溶液，按衍生化方法处理。照上述色谱条件，精密吸取10μl，连续进样6次，记录峰面积。结果，RSD=0.69%，表明本方法精密度良好。
2.7 对照品的线性考察
精密称取硫酸阿米卡星对照品16mg，置25ml容量瓶中，加入水使溶解并稀释至刻度，摇匀，分别精密吸取1.5、2.5、3.0、3.5、4.5mL，置于5mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。分别按柱前衍生化处理，精密上述溶液吸取10μL，注人液相色谱仪，依照2.1项下的色谱条件测定，记录色谱峰。以峰面积（Y）为纵坐标，对照品进样量（X）为横坐标，绘制标准曲线，计算回归方程。结果表明，硫酸阿米卡星在0.192～0.576mg·mL-1范围内呈良好的线性关系。
2.8 重现性试验
称取同一批的硫酸阿米卡星样品6份，按测定方法项下的方法制备供试品溶液，测定含量，并计算样品的RSD值，结果RSD为0.65%，结果表明此方法的重现性良好。
2.9 准确度试验
取对照品适量，精密称取已知含量的样品9份，置量瓶中，分别精密加入硫酸阿米卡星对照品，按项下方法制备成120%、140%、160%。取模拟样品照“含量测定”项下方法试验，计算回收率为99.6%，RSD为0.86%。
2.10 样品含量测定
依照上述含量测定方法，再按外标法以峰面积计算样品的含量，结果三批样品的含量分别为标示量的100.1%、99.9%、100.1%。
3 讨论
分别考察0.04moloL-1磷酸二氢铵溶液-乙腈-三乙胺（60∶40：0.01），0.27%磷酸二氢钾溶液（用2.2%的氢氧化钾溶液调节pH值至6.5）-甲醇（30：70），甲醇-水-冰醋酸（13∶86∶1），磷酸盐缓冲液（取0.05mol/L磷酸二氢钾溶液1000mL，加入三乙胺4mL，用磷酸调节pH值至6.5）-乙腈（90：10），甲醇-1%冰醋酸溶液（28∶72），[乙腈-四氢呋喃（25∶15）]-0.02%磷酸水溶液（35∶65），甲醇-乙腈-水（30∶20：50）不同比例的水，结果以甲醇-乙腈-水（30∶20：50）为水为水，供试品各峰分离效果最好，故选用甲醇-乙腈-水（30∶20：50）为水为水。本实验采用柱前衍生化高效液相色谱法效果好、方法简便、快捷、准确、专属性好，可用于硫酸阿米卡星注射液中硫酸阿米卡星的含量测定。
参考文献
[1]董烽.硫酸阿米卡星注射液的合理给药[J].西部医学，2006（6）.
[2]刁连生.阿米卡星的不良反应与合理应用[J].中国药事，2003（4）.
[3]王明仲.阿米卡星的临床应用研究进展[J].邯郸医学高等专科学校学报，2004（3）.
[4]安丽珠.阿米卡星抗生素后效应的临床应用[J].临床和实验医学杂志，2006（2）.
[5]张长法，李子贺，张胜林.硫酸阿米卡星治疗细菌感染性疾病152例临床分析[J].药品评价，2006（6）.
[6]何丹，杨林.柱后衍生化高效液相色谱法测定注射用硫酸阿米卡星[J].药物分析杂志，2009（6）.
[7]陈冠华，潘淑萍，胡江宁.硫酸阿米卡星含量及有关物质的HPLC-ELSD测定[J].中国医药工业杂志，2005（3）.
[8]张幸生，何丽芳，石东方.硫酸阿米卡星注射液含量的测定方法研究[J].时珍国医国药，2005（9）.
[9]王明娟，胡昌勤，金少鸿.硫酸阿米卡星注射液及有关物质的HPLC法分析[J].中国抗生素杂志，2001（5）.
[10]吴宏伟，王珑.HPLC-ELSD法测定硫酸阿米卡星的含量[J].中国药品标准，2007（3）.
[11]陈冠华，潘淑萍，胡江宁.硫酸阿米卡星含量及有关物质的HPLC-ELSD测定[J].中国医药工业杂志，2005（3）.
[12]高轶喆，侯常林，李玉兰.旋光度测定法测定硫酸阿米卡星注射液中主药的含量[J].中国药房，2005（23）.
[13]王建，王知坚，方翠凤.HPLC-ELSD法测定阿米卡星洗剂的含量[J].药物分析杂志，2009（6）.