【摘 要】
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【目的】补体结合试验是布鲁氏菌病（简称“布病”）血清学确诊方法。现行国家标准《动物布鲁氏菌病诊断技术》（GB/T 18646-2018）中收录的补体结合试验分为常量法补体结合试验（CFT）和微量法补体结合试验（mCFT），但两者之间的相关技术参数和结果判定标准均存在差异，导致常量法CFT和mCFT检测结果不一致。笔者通过对mCFT参数的改进优化，使现行标准中mCFT的检测结果等效于常量法CFT，实
【基金项目】
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国家重点研发计划（2016YFD0500902）；
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【目的】补体结合试验是布鲁氏菌病（简称“布病”）血清学确诊方法。现行国家标准《动物布鲁氏菌病诊断技术》（GB/T 18646-2018）中收录的补体结合试验分为常量法补体结合试验（CFT）和微量法补体结合试验（mCFT），但两者之间的相关技术参数和结果判定标准均存在差异，导致常量法CFT和mCFT检测结果不一致。笔者通过对mCFT参数的改进优化，使现行标准中mCFT的检测结果等效于常量法CFT，实现布病CFT的高通量准确诊断，对现有布病检测方法进行了补充。【方法】参照布病常量法CFT反应条件和诊断标准，对现行国标中mCFT的反应时间、稀释液、效价测定方法、结果判定等相关参数进行改进优化。改进后的mCFT方法与原mCFT方法相比，效价测定中受检血清的稀释度由1:2—1:64稀释改为1:10稀释，稀释方法与常量法CFT相同，确保微量法的检测临界值与常量法一致；采用酶标仪读取OD600值判定溶血强度，降低了试验人员肉眼判定的误差，提升了结果判定的效率和准确性；反应时间由37℃水浴30 min缩短为20 min，提高了检测效率又不影响检测结果；稀释液由巴比妥缓冲液改为生理盐水，与常量法使用相同稀释液并可获得理想结果。用改进的mCFT与国标的mCFT、常量法CFT分别对来自内蒙古、山东、北京、江苏等地区的409份临床牛、羊血清样品（牛血清163份、羊血清246份）进行检测，分析比较其符合率。【结果】采用改进的mCFT与常量法CFT对409份临床样品进行比对检测，改进的mCFT方法检出53份阳性、11份可疑、345份阴性；常量法CFT检出53份阳性、9份可疑、347份阴性。比较两者检测结果，只有2份牛血清样品用改进的mCFT方法检测为可疑，而常量法CFT检测为阴性，其余407份样品检测结果均一致。其中牛血清样品的符合率98.77%，羊血清样品的符合率100%，总符合率99.51%。而国标mCFT方法因阳性判定标准低于常量法CFT，且不设可疑区间，结果检出97份阳性、312份阴性。与常量法CFT结果相比较，牛血清样品的符合率88.34%，羊血清样品的符合率89.84%，总符合率为89.24%，远低于本研究改进的mCFT方法与常量法CFT 99.51%的符合率。【结论】通过对mCFT方法各参数的优化，建立了一种与常量法CFT判定标准一致，且检测结果高度符合的mCFT方法。
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