【摘 要】
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目的建立一种快速、高效的以非那西丁作为探针药物评价细胞色素P450 1A2(CYP1A2)酶活性的高效液相色谱-紫外检测方法。方法色谱柱为Agilent Zorbax SB-C18柱(50 mm×4.6 mm I
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目的建立一种快速、高效的以非那西丁作为探针药物评价细胞色素P450 1A2(CYP1A2)酶活性的高效液相色谱-紫外检测方法。方法色谱柱为Agilent Zorbax SB-C18柱(50 mm×4.6 mm I.D.,5μm);流动相为乙腈-水(含0.01%七氟丁酸),梯度洗脱,流速2.0 ml.min-1;检测波长为244 nm。非那西丁与人CYP1A2酶在37℃温孵适当时间后,加入50μl乙腈终止反应,10 000 g离心后取上清液进样分析测定。结果对乙酰氨基酚的保留时间为2.85 min,线性范围为1.00~200μmol.L-1(r=0.999 9),最低定量限(LLOQ)为1.00μmol.L-1,回收率为99.8%~102.3%;非那西丁的保留时间为3.68 min,线性范围为1.00~200μmol.L-1(r=0.999 9),最低定量限(LLOQ)为1.00μmol.L-1,回收率为98.3%~101.1%。两者的日内、日间相对标准偏差均小于15%,温孵体系中的其他内源性物质不干扰测定。结论该方法快速、稳定、灵敏度高,适合体外非那西丁及其代谢物对乙酰氨基酚的测定,可应用于体外CYP1A2酶活性的评价及酶动力学的研究。
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