p53基因的原核表达与活性测定

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目的原核表达P53重组蛋白,检测P53蛋白对人类白血病细胞系K562增生的影响。方法运用PCR技术鉴定了pET—p53重组质粒导入BL21菌株中p53基因的存在,并在IPTG的诱导下,大量产生外源基因产物。通过Ni—NAT亲和层析柱纯化分离P53蛋白,SDS—PAGE确定该蛋白准确性。以不同浓度的P53重组蛋白诱导K562细胞后,用MTT比色法、集落形成法、流式细胞术(FCM)测定P53蛋白对靶细胞增生的影响。结果成功地构建了含人野生型p53基因的原核表达载体,纯化了P53重组蛋白。活性测定结果表明,随着
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