【摘 要】
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目的 探讨miR-21及其下游PTEN/Akt信号通路在白藜芦醇促进大鼠骨髓源性内皮祖细胞(EPC)体外成血管能力中的作用.方法 采用密度梯度离心法分离大鼠四肢骨髓的单个核细胞,培养
【机 构】
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潍坊医学院生物科学与技术学院,山东省潍坊市261053;潍坊医学院临床医学院,山东省潍坊市261053;潍坊医学院医学研究中心,山东省潍坊市261053
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目的 探讨miR-21及其下游PTEN/Akt信号通路在白藜芦醇促进大鼠骨髓源性内皮祖细胞(EPC)体外成血管能力中的作用.方法 采用密度梯度离心法分离大鼠四肢骨髓的单个核细胞,培养于含10％胎牛血清的EGM-2MV完全培养基中诱导分化成EPC,实验用3～5代的EPC.白藜芦醇(20 μmol/L)干预12 h后,采用Matrigel胶检测EPC的体外成血管能力;实时荧光定量PCR检测miR-21及PTEN基因的表达情况;干扰miR-21表达后检测EPC的体外成血管能力;双荧光素酶报告基因检测miR-21对PTEN的靶向调控;Western blot检测PTEN蛋白表达情况以及Akt磷酸化水平.结果 白藜芦醇(20 μmol/L)明显促进EPC的体外成血管能力(P＜0.05),抑制了miR-21(P＜0.01)的表达,然而却促进了miR-21下游靶基因PTEN的基因(P＜0.01)及蛋白表达(P＜0.05),进而抑制PTEN下游信号分子Akt的磷酸化水平.双荧光素酶报告基因检测结果显示,miR-21可与PTEN mRNA的3'UTR靶向结合(P＜0.01).结论 miR-21调控了白藜芦醇促EPC的体外成血管能力,其机制可能是通过PTEN/Akt信号通路来发挥的,该研究结果揭示了白藜芦醇调控EPC功能一种新的细胞内信号机制.
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