论文部分内容阅读
【摘 要】格列吡嗪为第二代磺酰脲类抗糖尿病药，可使空腹及餐后血糖降低。本文对格列吡嗪口崩片的人体生物等效性进行研究。方法：选择40名健康志愿者，随机双交叉单剂量口服10mg，采用高效液相色谱法测得不同时间血液中格列吡嗪的含量。实验结果表明格列吡嗪口崩片的达峰时间较普通片剂明显提前。
【关键词】格列吡嗪；人体；生物等效性
格列吡嗪为第二代磺酰脲类抗糖尿病药，可使空腹及餐后血糖降低。格列吡嗪主要作用为刺激胰岛B 细胞分泌胰岛素，从而使K+通道关闭，引起膜电位改变，Ca2+通道开启，胞液内Ca2+升高，促使胰岛素分泌[1-2]。格列吡嗪主要用于单用饮食控制治疗未能达到良好效果的轻、中度非胰岛素依赖型病人，治疗有效率约87%。生物等效性是指药学等效制剂或可替换药物在相同试验条件下，服用相同剂量，其活性成分吸收程度和速度的差异无统计学意义。本文对格列吡嗪口崩片的人体生物等效性进行研究。
1.仪器与试药
Vertex Sti P5000高效液相色谱仪（上海禾工科学仪器有限公司）；CO-1000型色谱柱温箱（上海子期实验设备有限公司）；HQ-50高端试剂级超纯水机（郑州华新电气公司）；SCQ-K001空气超声波清洗器（上海声彦超声仪器有限公司）；FA1204B电子分析天平（上海精科天美贸易有限公司）；320XT电子分析天平（上海精科天美贸易有限公司）；RE-5298旋转蒸发器（上海亚荣生化仪器厂）；TG16-WS台式高速离心机（上海卢湘仪离心机仪器有限公司）；Chemvak无油真空泵（北京桑翌实验仪器研究所）；TU-1810紫外可见分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司）。氢氧化钠（苏州市元硕精细化学品有限公司）、庚烷磺酸钠（苏州市元硕精细化学品有限公司）、磷酸二氢钠（苏州逸祥化工科技有限公司）、三乙胺（上海德诺化工有限公司）、乙腈（济南福尔化工科技有限公司）、甲醇（河北东光恒达化工有限责任公司）、甲酸（河北东光恒达化工有限责任公司）、冰醋酸（济南福尔化工科技有限公司）、乙醚（常州市云阳化工有限公司）。
2.含量测定
2.1色谱条件
色谱柱为YMCCl8规格为（4.6mm×250mm，5μm）；甲醇-乙腈-水-甲酸（30：35：35∶0.2）为流动相；检测波长为225nm；流速1.0mL·min-1；柱温40℃。
2.2受试者选择
本研究根据受试者入选、排除标准从89名志愿者中筛选出40名受试者参加本研究。所有受试者均完成了本研究的全部过程，无中途退出者。采用开放、随机分组、二组服用格列吡嗪口崩片和格列吡嗪普通片单剂量10mg片剂的交叉试验设计进行本项生物等效性研究。
2.3给药方法与样品采集
采用两制剂双周期交叉的试验设计， 受试者按随机原则分成 2组，分别给药。
2.4对照品溶液的制备
取格列吡嗪对照品5mg，精密称定，置100mL量瓶中，加流动相适量振摇使溶解，并稀释至刻度。摇匀，配制成50μg/ml的内标贮备液。精密量取5mL内标溶液，置于50毫升容量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，配制成5μg/ml的对照品溶液。
2.5供试品溶液的制备
精确吸取待检测血浆，加入0.01mol/l盐酸溶液0.1毫升，涡旋混匀1分钟，再加入乙醚10ml，高速离心10分钟，40℃水浴空气吹干，加入流动相溶解，涡旋1分钟，使用0.45微孔滤膜过滤，取续滤液，即得。
2.6标准曲线的制备
取空白血浆分别配成质量浓度相当于30μg/ml、60μg/ml、90μg/ml、120μg/ml、150μg/ml、180μg/ml、210μg/ml的对照品溶液，分别精密吸取10μL注入HPLC，记录色谱图。以峰面积积分值A（μg）为横坐标，进样量为纵坐标，绘制标准曲线，计算回归方程。试验表明，格列吡嗪对照品在30～210ug·L-1范围内线性关系良好。
2.7回收率试验
采用加样回收试验，取供试品血浆，精密添加一定量的格列吡嗪对照品，加入0.01mol/l盐酸溶液0.1毫升，涡旋混匀1分钟，再加入乙醚10ml，高速離心10分钟，40℃水浴空气吹干，加入流动相溶解，涡旋1分钟，使用0.45微孔滤膜过滤，取续滤液，按测定方法，计算回收率。6次测定的平均回收率为95.3%，RSD为1.62%。
2.8样品稳定性试验
取供试品血浆，按2.5项下的供试品制备方法制备供试品，将供试品置4℃下放置，分别于第0、2、4、6小时，精密吸取供试品溶液10μl注入液相色谱仪中，记录色谱图。测定格列吡嗪的含量，RSD=0.93%。结果表明供试品6小时内稳定。
3.结果
格列吡嗪口崩片的达峰时间较普通片剂明显提前。生物利用度参数40名健康志愿者随机双交叉单剂量口服10mg格列吡嗪口崩片和格列吡嗪片后，体相对生物利用度为F=（103.2±6.3）%以试验制剂和参比制剂的AuC24计算。试验制剂AUC的90%置信区间落在标准参比制剂的96.66%～108.67%内，ρmax在82.56%～116.56%，可判两制剂生物等效。
4.讨论
HPLC方法是常用的血浆格列吡嗪检测方法[3-11]。在较广泛的流动分别考察甲醇-乙腈-水-甲酸（30：35：35∶0.2），甲醇-缓冲液（ 磷酸二氢钠6.0g，加水溶解并稀释至1000ml，加三乙胺1ml，用浓氢氧化钠溶液调节pH 值至7.0）（30∶70），2%庚烷磺酸钠溶液-甲醇-乙腈-三乙胺（25：30：30：0.1），乙腈一水一三乙胺（40：65：0.1）用磷酸调节pH至7.0不同比例的流动相，结果以甲醇-乙腈-水-甲酸（30：35：35∶0.2）为流动相，供试品各峰分离效果最好，故选用甲醇-乙腈-水-甲酸（30：35：35∶0.2）为流动相。 [科]
【参考文献】
[1]车晋伟，胡森.格列吡嗪对内毒素血症羊血流动力学及全身氧输送的作用[J].中国危重病急救医学，2006（11）.
[2]张兰，张文萍，刘晓红，孙英华，孙进，何仲贵.格列吡嗪双层渗透泵片的制备[J].中国药剂学杂志（网络版），2009（06）.
[3]张洪德，朱熊，周炳生，吴增常.国产与进口格列吡嗪治疗非胰岛素依赖型糖尿病比较[J].中国新药与临床杂志，1993（03）.
[4]任进民，樊德厚，杨宝通，蒋俊康，黄慧英，王春英.格列吡嗪片溶出度考察[J].中国医院药学杂志，1996（12）.
[5]徐淑贞.两种测定格列吡嗪胶囊溶出度方法的比较[J].海峡药学，1998（04）.
[6]陈燕忠，吕竹芬.格列吡嗪缓释胶囊在兔体内的药物动力学及相对生物利用度[J].上海医药，1998（08）.
[7]黄圣凯，杨劲，黄开军.格列吡嗪胶囊剂的相对生物利用度和生物等效性评价[J].中国新药与临床杂志，1995（03）.
[8]颜勤明，左红.格列吡嗪与格列齐特对控制餐后高血糖疗效的比较[J].实用医学杂志，1999（07）.
[9]傅善基，刘向群，张健，王谦.人血清格列吡嗪高效液相色谱测定方法的研究[J].山东生物医学工程，2002（01）.
[10]胡桂.格列本脲替代格列吡嗪：最小费用分析[J].药物流行病学杂志，1997（02）.
[11]赵红燕.磺酰脲类降血糖药格列吡嗪控释片[J].国外医药.合成药.生化药.制剂分册，1998（04）.
【关键词】格列吡嗪；人体；生物等效性
格列吡嗪为第二代磺酰脲类抗糖尿病药，可使空腹及餐后血糖降低。格列吡嗪主要作用为刺激胰岛B 细胞分泌胰岛素，从而使K+通道关闭，引起膜电位改变，Ca2+通道开启，胞液内Ca2+升高，促使胰岛素分泌[1-2]。格列吡嗪主要用于单用饮食控制治疗未能达到良好效果的轻、中度非胰岛素依赖型病人，治疗有效率约87%。生物等效性是指药学等效制剂或可替换药物在相同试验条件下，服用相同剂量，其活性成分吸收程度和速度的差异无统计学意义。本文对格列吡嗪口崩片的人体生物等效性进行研究。
1.仪器与试药
Vertex Sti P5000高效液相色谱仪（上海禾工科学仪器有限公司）；CO-1000型色谱柱温箱（上海子期实验设备有限公司）；HQ-50高端试剂级超纯水机（郑州华新电气公司）；SCQ-K001空气超声波清洗器（上海声彦超声仪器有限公司）；FA1204B电子分析天平（上海精科天美贸易有限公司）；320XT电子分析天平（上海精科天美贸易有限公司）；RE-5298旋转蒸发器（上海亚荣生化仪器厂）；TG16-WS台式高速离心机（上海卢湘仪离心机仪器有限公司）；Chemvak无油真空泵（北京桑翌实验仪器研究所）；TU-1810紫外可见分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司）。氢氧化钠（苏州市元硕精细化学品有限公司）、庚烷磺酸钠（苏州市元硕精细化学品有限公司）、磷酸二氢钠（苏州逸祥化工科技有限公司）、三乙胺（上海德诺化工有限公司）、乙腈（济南福尔化工科技有限公司）、甲醇（河北东光恒达化工有限责任公司）、甲酸（河北东光恒达化工有限责任公司）、冰醋酸（济南福尔化工科技有限公司）、乙醚（常州市云阳化工有限公司）。
2.含量测定
2.1色谱条件
色谱柱为YMCCl8规格为（4.6mm×250mm，5μm）；甲醇-乙腈-水-甲酸（30：35：35∶0.2）为流动相；检测波长为225nm；流速1.0mL·min-1；柱温40℃。
2.2受试者选择
本研究根据受试者入选、排除标准从89名志愿者中筛选出40名受试者参加本研究。所有受试者均完成了本研究的全部过程，无中途退出者。采用开放、随机分组、二组服用格列吡嗪口崩片和格列吡嗪普通片单剂量10mg片剂的交叉试验设计进行本项生物等效性研究。
2.3给药方法与样品采集
采用两制剂双周期交叉的试验设计， 受试者按随机原则分成 2组，分别给药。
2.4对照品溶液的制备
取格列吡嗪对照品5mg，精密称定，置100mL量瓶中，加流动相适量振摇使溶解，并稀释至刻度。摇匀，配制成50μg/ml的内标贮备液。精密量取5mL内标溶液，置于50毫升容量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，配制成5μg/ml的对照品溶液。
2.5供试品溶液的制备
精确吸取待检测血浆，加入0.01mol/l盐酸溶液0.1毫升，涡旋混匀1分钟，再加入乙醚10ml，高速离心10分钟，40℃水浴空气吹干，加入流动相溶解，涡旋1分钟，使用0.45微孔滤膜过滤，取续滤液，即得。
2.6标准曲线的制备
取空白血浆分别配成质量浓度相当于30μg/ml、60μg/ml、90μg/ml、120μg/ml、150μg/ml、180μg/ml、210μg/ml的对照品溶液，分别精密吸取10μL注入HPLC，记录色谱图。以峰面积积分值A（μg）为横坐标，进样量为纵坐标，绘制标准曲线，计算回归方程。试验表明，格列吡嗪对照品在30～210ug·L-1范围内线性关系良好。
2.7回收率试验
采用加样回收试验，取供试品血浆，精密添加一定量的格列吡嗪对照品，加入0.01mol/l盐酸溶液0.1毫升，涡旋混匀1分钟，再加入乙醚10ml，高速離心10分钟，40℃水浴空气吹干，加入流动相溶解，涡旋1分钟，使用0.45微孔滤膜过滤，取续滤液，按测定方法，计算回收率。6次测定的平均回收率为95.3%，RSD为1.62%。
2.8样品稳定性试验
取供试品血浆，按2.5项下的供试品制备方法制备供试品，将供试品置4℃下放置，分别于第0、2、4、6小时，精密吸取供试品溶液10μl注入液相色谱仪中，记录色谱图。测定格列吡嗪的含量，RSD=0.93%。结果表明供试品6小时内稳定。
3.结果
格列吡嗪口崩片的达峰时间较普通片剂明显提前。生物利用度参数40名健康志愿者随机双交叉单剂量口服10mg格列吡嗪口崩片和格列吡嗪片后，体相对生物利用度为F=（103.2±6.3）%以试验制剂和参比制剂的AuC24计算。试验制剂AUC的90%置信区间落在标准参比制剂的96.66%～108.67%内，ρmax在82.56%～116.56%，可判两制剂生物等效。
4.讨论
HPLC方法是常用的血浆格列吡嗪检测方法[3-11]。在较广泛的流动分别考察甲醇-乙腈-水-甲酸（30：35：35∶0.2），甲醇-缓冲液（ 磷酸二氢钠6.0g，加水溶解并稀释至1000ml，加三乙胺1ml，用浓氢氧化钠溶液调节pH 值至7.0）（30∶70），2%庚烷磺酸钠溶液-甲醇-乙腈-三乙胺（25：30：30：0.1），乙腈一水一三乙胺（40：65：0.1）用磷酸调节pH至7.0不同比例的流动相，结果以甲醇-乙腈-水-甲酸（30：35：35∶0.2）为流动相，供试品各峰分离效果最好，故选用甲醇-乙腈-水-甲酸（30：35：35∶0.2）为流动相。 [科]
【参考文献】
[1]车晋伟，胡森.格列吡嗪对内毒素血症羊血流动力学及全身氧输送的作用[J].中国危重病急救医学，2006（11）.
[2]张兰，张文萍，刘晓红，孙英华，孙进，何仲贵.格列吡嗪双层渗透泵片的制备[J].中国药剂学杂志（网络版），2009（06）.
[3]张洪德，朱熊，周炳生，吴增常.国产与进口格列吡嗪治疗非胰岛素依赖型糖尿病比较[J].中国新药与临床杂志，1993（03）.
[4]任进民，樊德厚，杨宝通，蒋俊康，黄慧英，王春英.格列吡嗪片溶出度考察[J].中国医院药学杂志，1996（12）.
[5]徐淑贞.两种测定格列吡嗪胶囊溶出度方法的比较[J].海峡药学，1998（04）.
[6]陈燕忠，吕竹芬.格列吡嗪缓释胶囊在兔体内的药物动力学及相对生物利用度[J].上海医药，1998（08）.
[7]黄圣凯，杨劲，黄开军.格列吡嗪胶囊剂的相对生物利用度和生物等效性评价[J].中国新药与临床杂志，1995（03）.
[8]颜勤明，左红.格列吡嗪与格列齐特对控制餐后高血糖疗效的比较[J].实用医学杂志，1999（07）.
[9]傅善基，刘向群，张健，王谦.人血清格列吡嗪高效液相色谱测定方法的研究[J].山东生物医学工程，2002（01）.
[10]胡桂.格列本脲替代格列吡嗪：最小费用分析[J].药物流行病学杂志，1997（02）.
[11]赵红燕.磺酰脲类降血糖药格列吡嗪控释片[J].国外医药.合成药.生化药.制剂分册，1998（04）.