【摘 要】
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猪丁型冠状病毒(porcine deltacoronavirus,PDCoV)是近年新发现的一种猪肠道病原体,主要感染仔猪并引起仔猪腹泻甚至死亡,针对该病建立快速、准确的血清学检测方法尤为重要.本研究以PDCoVHNZK-04毒株为模板扩增M基因并将其克隆至原核表达载体pET-32a中,构建了重组质粒pET-32a-PDCoV-M.将阳性重组质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,并用IPTG诱导M蛋白表达,SDS-PAGE显示目的蛋白的分子量约为41kDa;Western blot结果显示该蛋白可以与P
【机 构】
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河南农业大学动物医学院,河南郑州 450002;河南省动物性食品安全重点实验室,河南郑州 450002
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猪丁型冠状病毒(porcine deltacoronavirus,PDCoV)是近年新发现的一种猪肠道病原体,主要感染仔猪并引起仔猪腹泻甚至死亡,针对该病建立快速、准确的血清学检测方法尤为重要.本研究以PDCoVHNZK-04毒株为模板扩增M基因并将其克隆至原核表达载体pET-32a中,构建了重组质粒pET-32a-PDCoV-M.将阳性重组质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,并用IPTG诱导M蛋白表达,SDS-PAGE显示目的蛋白的分子量约为41kDa;Western blot结果显示该蛋白可以与PDCoV阳性血清特异性结合.以纯化后的M蛋白作为靶抗原,建立了一种间接ELISA检测方法.用该方法对其他猪常见病毒,包括猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)和猪圆环病毒2型(PCV2)的阳性血清进行检测,结果均为阴性;批内重复试验和批间重复试验变异系数均小于10％,表明建立的PDCoV间接ELISA检测方法具有良好的特异性和重复性,可以用于PDCoV感染的临床检测和诊断.
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为了解宠物猫源大肠杆菌对临床常用抗菌药物的耐药性及其耐药基因携带情况,在乌鲁木齐市多家宠物医院采集宠物猫肛拭子样品59份进行大肠杆菌的分离鉴定,通过琼脂稀释法测定10种抗菌药物的最小抑菌浓度,利用PCR方法检测13种耐药基因.结果:分离鉴定出大肠杆菌47株,分离率79.7％(47/59).分离菌对四环素(TET)(83.0％)、阿莫西林-克拉维酸(A/C)(66.0％)和磺胺异噁唑(FIS)(66.0％)耐药情况严重;对头孢他啶(TAZ)、头孢曲松(CRO)、恩诺沙星(EN)、庆大霉素(GEN)耐药率在3
穿支皮瓣是在传统轴型皮瓣基础上发展而来,以穿支血管供血,仅包括皮肤与浅筋膜组织的一种新型皮瓣,由于改变了深筋膜血管网是皮瓣赖以生存的传统观点,使皮瓣设计和形成更具灵活性和多样性[1-3].2012年唐举玉[4]在国际上首次提出的特殊形式穿支皮瓣是应用传统穿支皮瓣的“微创与美学”理念、根据受区修复要求对皮瓣供区的一级源血管及其分支和相应供养的组织(皮肤、筋膜、肌肉、骨组织)进行优化设计、无创解剖、分割和重组,根据受区创面重建需要切取不同组织块(嵌合)或相同组织块(分叶),然后再削薄、组装、拼接成与受区创面内
为进一步探索波形蛋白(vimentin)调控绒山羊绒毛生长的作用机制,以内蒙古遗传种子资源阿尔巴斯白绒山羊皮肤中的毛囊组织为材料,利用PCR技术和酵母双杂交技术对根据GenBank中山羊的vimentin蛋白序列,运用蛋白质互作在线软件预测和液相色谱质谱联用采集免疫共沉淀数据筛选出肌动蛋白(ACTB)和vimentin进行基因引物设计、克隆、酵母表达载体构建和蛋白互作鉴定.结果 显示:成功克隆出绒山羊vimentin基因CDS区序列的长度为1401 bp,ACTB基因CDS区序列的长度为1128 bp;构
2015年山东省烟台市某免疫伪狂犬病疫苗Bartha-K61猪场暴发疑似伪狂犬病疫情,临床表现为妊娠母猪繁殖障碍,仔猪神经症状.脑组织病料样品接种BHK21细胞,分离获得1株伪狂犬病病毒(PRV),命名为PRV-YT株.该病毒株gE基因与JS-2012、HN1201和ZJ01株序列同源性为99.4％～99.8％,且位于同一遗传进化分支.选择70日龄PRV阴性健康猪接种PRV-YT株,发病率和死亡率均达100％(5/5),均表现严重脑组织、肝脏与肺脏损伤,表明PRV-YT株为猪伪狂犬病病毒变异强毒株.本研究
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