伪狂犬病病毒在NF-κB家族p65基因敲除细胞系的复制规律研究

• 作 者: 常雯茹 段利芳 杨乐 马英先 王棋 翟云云 周鲁豫 张爽 明
• 机 构: 河南农业大学,河南农业大学
• 出 处: 中国畜牧兽医
• 发表日期: 2021年1期
• 关键词: CRISPR/Cas9 NF-ΚB 猪 伪狂犬病病毒(PRV) CRISPR/Cas9 NF-κB porcine Pseudorabies virus(PRV
• 基金项目: 优势特色学科建设经费(203/18xk0102),万人计划青年拔尖人才(W03070106),河南省高校青年骨干教师(2016GGJS-033),河南省自然科学基金面上项目(83),河南省重点研发与推广专项(202102110100)

试验旨在研究伪狂犬病病毒(PRV)在NF-κB家族p65基因敲除细胞系中的复制规律。利用慢病毒介导的CRISPR/Cas9基因定点修饰技术构建猪肺泡巨噬细胞(3D4/21)p65基因稳定敲除细胞系。通过构建p65-sgRNA重组质粒,转染至HEK293T/17细胞,收取慢病毒,感染3D4/21细胞后利用嘌呤霉素筛选获得多克隆细胞系,T7核酸酶检测敲除效率,再通过有限稀释法获得3D4/21-p65^-/-的稳定细胞系。CCK-8试剂盒检测3D4/21细胞中敲除p65基因后对细胞增殖的影响;流式细胞术检测PR