粗茎秦艽多糖GCP-1的分离纯化、结构表征及抗炎活性评价

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目的 从粗茎秦艽Gentiana crassicaulis中分离纯化多糖,初步分析其结构特征并研究其体外抗炎活性.方法 采用热水浸提粗茎秦艽粗多糖(Gentiana crassicaulis polysaccharide,GCP),再经Cellulose DE-52纤维素离子交换柱、SephadexG-100柱进行分离纯化,得到GCP-1.采用高效凝胶色谱法(HPGPC)鉴定纯度并测定其相对分子质量;采用高效液相色谱(HPLC)测定其单糖组成;采用红外光谱(IR)、气相色谱-质谱联用(GC-MS)和核磁共振波谱法对该多糖的结构进行初步分析;采用CCK-8法检测其对小鼠单核巨噬细胞RAW264.7增殖的影响;利用ELISA试剂盒测定其对白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、一氧化碳(NO)和肿瘤坏死因子(tumornecrosis factor-α,TNF-α)释放量的影响.结果 从粗茎秦艽中分离纯化得到GCP-1多糖,相对分子质量为6.87×104,由甘露糖、鼠李糖、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖和阿拉伯糖7种单糖组成,其物质的量比为0.07∶ 3.07∶0.42∶1.98∶1.33∶5.22∶6.76;IR,GC-MS和核磁共振波谱分析表明,GCP-1是一种典型的果胶多糖,含有HG和RGI区域及AgⅠ和AgⅡ侧链;质量浓度在10~200 μg/mL时,GCP-1能明显促进小鼠单核巨噬细胞RAW 264.7的增殖(P<0.05),并能明显抑制小鼠单核巨噬细胞RAW 264.7分泌IL-1β、NO和TNF-α.结论 GCP-1为从粗茎秦艽中分离得到的天然来源的均一多糖,其结构和活性初步研究为秦艽多糖成分的开发提供了一定参考.
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