【摘 要】
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目的 探讨组蛋白去乙酰化酶(HDAC)抑制剂丁酸钠(NaB)对大鼠胚胎干细胞(ESC)向神经元分化的影响.方法 利用含bFGF、EGF的DMEM/F12培养基培养原代ESC;应用DAPI染色,荧光显微镜
【机 构】
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510182,广州医科大学人体解剖教研室
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目的 探讨组蛋白去乙酰化酶(HDAC)抑制剂丁酸钠(NaB)对大鼠胚胎干细胞(ESC)向神经元分化的影响.方法 利用含bFGF、EGF的DMEM/F12培养基培养原代ESC;应用DAPI染色,荧光显微镜观察不同药物浓度NaB(0.2、1、2μmol/L)作用48 h后对细胞凋亡的影响;免疫荧光检测NaB (1μmol/L)作用72 h后和对照组(PBS)ESC双肾上皮质激素(DCX)和DAPI,计算DCX/DAPI的比值;免疫印迹检测不同浓度NaB(0.2、1、2μmol/L)作用48 h后和对照组(PBS)ESC组蛋白H3、H4乙酰化水平.结果 在1、2μmol/L NaB组ESC出现明显凋亡,细胞形状不规则,核固缩,核内可见致密的颗粒荧光,视野下细胞碎片较多,且凋亡细胞百分比明显高于0.2μmol/L NaB组和对照组[(7.85 ± 0.73)%、(18.42±2.04)%比(3.48±0.35)%、(2.16±0.32)%,均P<0.05].1μmol/L NaB组ESC DCX/DAPI比值高于对照组(38.51±4.33比14.81±1.77,P<0.05).随NaB药物浓度的增加,ESC蛋白H3、H4乙酰化程度较对照组增强,0.2μmol/L组处理后乙酰化组蛋白H3和H4表达变化不明显,1、2μmol/L时组蛋白H3和H4乙酰化程度明显增高(均P<0.05).结论 HDAC抑制剂NaB可明显促使ESC向神经元分化.
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