【摘 要】
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背景:巨噬细胞集落刺激因子(macrophage colony-stlimulating factor,M-CSF)/核因子_kB受体激活物配体(receptor activatorof nuclear kappa B ligand,RANKL)两种细胞因子协
【机 构】
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靖江市人民医院骨科,江苏省,靖江市,214500南京医科大学第一附属医院骨科,江苏省,南京市,210029;
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背景:巨噬细胞集落刺激因子(macrophage colony-stlimulating factor,M-CSF)/核因子_kB受体激活物配体(receptor activatorof nuclear kappa B ligand,RANKL)两种细胞因子协同诱导骨髓干细胞形成破骨细胞是一种较新的,可以获取较高纯度和数量破骨细胞的诱导培养法,但尚缺乏统一的培养标准.目的:建立有效的M-CSF/RANKL诱导小鼠骨髓干细胞诱导分化破骨细胞的培养体系.方法:分离小鼠四肢骨获取骨髓干细胞.将小鼠骨髓干细胞在含有M-CSF的α-MEM培养基中培养24 h,调整细胞浓度为10~7,10~8,10~9L~(-1).然后在培养基中同时加入10μg/LM-CSF和不同质量浓度(20,50,100μg/L)RANKL.行抗酒石酸酸性磷酸酶染色观察干细胞向破骨细胞的转变过程及细胞形态和染色情况,并对各组染色阳性的破骨细胞进行计数,比较不同诱导条件对破骨样细胞数量的影响. 结果与结论:培养3 d后可见少量破骨样细胞,胞质内含许多红色抗酒石酸酸性磷酸酶染色阳性颗粒,细胞内可见淡染的双核;培养6 d后可见大量染色阳性破骨样细胞;培养9 d后出现多核巨型染色阳性破骨样细胞,细胞明显增大,细胞核可达到3个以上.在固定细胞接种浓度条件下,RANKL质量浓度为100 μg/L时诱导分化形成的破骨样细胞数量较另两质量浓度增多(P
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